人工种子与脱毒.pptVIP

第4章 人工种子 与植物脱毒;1 人工种子;※ 人工种子的概念 ;※人工种子的优点;以体细胞胚为繁殖体的人工种子;以器官为繁殖体的人工种子;1.1 人工种子的制作; 1）胚状体的诱导： 胚状体可从悬浮培养的单细胞得到，也可通过试管培养的愈伤组织、花粉或胚囊获得。胚状体一般在培养物的表面产生，其形状与合子胚类似，但胚状体却是无性繁殖的产物。实际操作中，一般在试管中诱导出愈伤组织，并在含生长素的培养液中悬浮培养，然后置于含生长素的发酵罐中，使细胞迅速扩增，再将细胞移入无生长素的发酵罐中诱导出大量胚状体。 2）胚状体同步化处理或分选： 胚状体的同步化是指促使所有培养的细胞或发育中的细胞团块进入同一个分裂时期。只有同步化了细胞才可能成批地产出成熟胚胎。常用的方法有： （1）化学方法：饥饿法——将培养基中的一些重要成分反复去除和添加；阻断法——在培养初期加如DNA合成抑制剂，如5-氨基脲嘧啶，阻断细胞分裂的G1期。 （2）物理方法：低温处理法、过滤筛选法、渗透压分离法、密度梯度离心法(体胚不同的发育阶段密度有差异)等到胚状体胎成熟以后，就可以进行人工种子的包埋了。其中过滤筛选法较实用、快速。;1.1.2 人工种皮制备;外种皮常用材料： Elvax 4260(乙烯、乙烯基乙酸和丙烯酸共聚物，1987，美国)涂膜，价高，操作复杂，效果不佳。 Tullanox和Cab-0-sil(二氧化硅化合物），以粉末状包裹在人工种子胶囊外层，操作时只需将胶囊在材料中滚动即可。 硅酮种衣，能抗真菌，渗入水蒸汽和氧气，处于试验之中。;1.1.3 人工胚乳配制;1.1.4 包埋;1.2 贮藏;存在问题;小结;2. 植物脱毒; ; 1）热处理脱毒原理： ①病毒是DNA大分子，病毒进入植物细胞后，随植物细胞DNA一起复制。热处理并不能杀死细胞，只是钝化病毒的活性，使病毒在植物体内增殖减缓或增殖停止，而失去病毒的侵染能力。 　　②热处理是一种物理效应，可加速植物细胞分裂，在激烈分裂的细胞中正常核蛋白合成占优势，使植物细胞在与病毒繁殖的竞争中取胜。因此加速分生组织细胞的分裂，能够获得无病毒植株。 ; 依据病毒对高温的敏感，寄主耐高温。利用这一差异，选择适当的温度和处理时间，进行高温处理，就能使寄主体内病毒浓度降低，传递速度减慢或失去活性，而寄主细胞仍然存活，并加快分裂和生长。;2）热处理脱毒方法;　　热处理广泛应用于葡萄、草莓、马铃薯和菊花等植物。如：葡萄置于38 ℃可去除扇叶病毒。 　　热处理对葡萄扇叶病毒、草莓斑驳病毒、苹果花叶病毒等球形病毒有作用，而对另一些病毒不起作用，因此，必须与茎尖培养相结合脱毒效果更好。;2.1.2 化学方法脱毒;2.1.3 生物法 茎尖脱毒 茎尖微体嫁接 愈伤组织诱导脱毒 珠心胚培养法 花药培养脱毒;（1）茎尖培养脱毒原理 （2）培养基 （3）茎尖培养方法 （4）影响微茎尖培养的因素 ①外植体大小 ②培养条件 ③外植体的生理状态; （1）茎尖培养脱毒原理?? 病毒在植物体内分布不均匀，其数量随植株部位及年龄而异，越靠近茎顶端区域，病毒感染的程度越低，生长点即分生组织（约0.1-1mm）几乎不含或含病毒很少。; 植物的去病毒技术，实质上就是采取不含病毒颗粒或病毒颗粒含量甚少的0.1～0.5mm 带1～2个叶原基的茎尖作为外植体，进行微繁殖，使其培养成完整的无病毒小植株的技术。; 1、植物体病毒的移动的2条途径：维管系统和胞间连丝。 2、植物细胞分裂和病毒繁殖之间存在相互竞争 3、茎尖中存在高水平内源激素，可抑制病毒的增殖。 4、在植物体内存在有一种“病毒钝化系统”，在分生组织中的活性最高，因而使分生组织不受侵染。 ;（2）培养基??? 一般以White、MS为基本培养基，提高钾盐和铵盐含量有利于茎尖生长。MS培养某些植物茎尖时，有些离子浓度过高应稀释。 　　在双子叶植物中，激素可能在第2对叶原基中合成，所以茎尖的圆锥组织生长激素不能自给，必须加入生长素与细胞分裂素，浓度要合适。在生长素中应避免用易促进愈伤组织化的2，4-D，宜用NAA或IBA；细胞分裂素用KT或BA；GA3对某些植物茎尖培养有用。;（3）茎尖的培养方法??? 需要一台解剖镜（8-40倍）。 剥离茎尖要迅速并尽快接种，或在一个衬有无菌湿滤纸的培养皿内进行操作，以防茎尖变干。 　　消毒：叶片包被严紧的芽，如菊花、兰花，只须75%酒精中浸蘸一下，而叶片包被松散的芽，如香石竹、马铃薯等，则要用0.1%次氯酸钠表面消毒10min。;;;The