蛋白质组学研究介绍结合双向电泳.pptVIP

Excision / digestion 七、切胶——质谱前处理 差异蛋白点的切取 脱色 胶内酶解 肽片断提取 点样 质谱分析 数据库比对进行鉴定 手工切胶的缺点： ?低丰度蛋白无法准确切取 ?非密闭系统,污染无法避免 ?角蛋白污染 ?其它杂质污染 ?工作时间长 全自动蛋白切取仪 可切取的范围广泛，速度快，精度高，避免污染。 Mass spectrometry 5000 7500 10000 12500 15000 0 25 50 75 100 0 25 50 75 100 0 25 50 75 100 0 25 50 75 100 0 25 50 75 100 0 25 50 75 100 5000 7500 10000 12500 Control Control Control Treated 15000 Treated Treated MALDI-ToF-MS 八、质谱分析 根据实验流程介绍相关仪器 九、验证——WesternBlot（免疫印迹法） Semi Dry 湿转 半干转印 全能型转印 根据实验流程介绍相关仪器 ChemiDocMP全能型凝胶成像系统 蛋白质组学介绍 ——结合BIO-RAD相关仪器 One Genome – Many Proteomes 对生物的生化功能,形成途径与代谢过程之研究而更加了解 Normal gene expression 基因体功能的最终目的就是表现蛋白质;基因表现及调控(Gene expression and regulation)的过程,则是为了保障蛋白质能适时,适地并适量的表现 ． 中心法则 蛋白质组学(proteomics)，就是从整体的角度，分析细胞内动态变化的蛋白质组成成份、表达水平与修饰状态，了解蛋白质之间的相互作用与联系，揭示蛋白质功能与细胞生命活动规律的一个新的研究领域。 蛋白质组学与基因组学的关系： 1、蛋白质组与基因组相对应 2、基因组是相对稳定的，而蛋白质组是一个动态的概念 3、蛋白质组是基因组研究不可缺少的后续部分 蛋白质组学 蛋白质组学的研究可以帮助我们去寻找新的疾病指标,相信在不久的将来将有助于监测疾病的进程,更进一步有助于疾病的治疗。 1-1 心血管疾病研究领域 扩大性心肌病变(Dilated cardiomyopathy, DCM )是一种严重的心脏疾病,也是现代繁忙的都市人经常易患的疾病,最后将导致心脏失去功能;病人通常都只能期待换心以维持生命。 运用蛋白质体的方法已经鉴定出心肌中150种蛋白质,比较后发现有25个蛋白质有明显的差异;经由这些已确认的蛋白质资料库与病人(或高危险群)的蛋白质做比对,或许可以在疾病产生初期达到早期预防的目的.  一、疾病诊断 蛋白质组学应用 1-2肿瘤研究领域 1-2-1肺癌 肺癌是最具肿瘤性 (oncological) 的疾病之一.临床上肺癌的诊断往往 已属晚期.直至目前为止,并无有效的治疗方案可得.所以任何有助于肺癌诊断 或预后的发展都是有助于肺癌的治疗方针的。 因此,许多科学家致力于以双向电泳技术研究肺癌.在分析组织病理学上不 同种类的肺癌细胞时,结果发现不同组织病理类型细胞体会有不同的蛋白质表 现图谱。 另外,已发现有一种专一性的蛋白质仅会出现在原发性肺腺癌上.例用此技术将可有效地鉴定出新的肿瘤标志 (tumor marker),在鉴别诊断麟状上皮细胞肺癌与腺癌时有相当大的助益。 蛋白质组学应用 人类的肾脏癌是很难治愈的癌症,其中源自于近端肾小管上皮细胞的肾细胞癌大约占成人恶性肿瘤的3 %.但如同许多实质性肿瘤般,肾细胞癌发现时期均属癌症末期,外科手术已难治愈的阶段.并且无适当的肿瘤标志可参考。 科学家在用双向电泳技术研究肾脏癌组织的研究中发现有四种蛋白质的表现在肾癌细胞中会消失. 虽然该研究没有发现特定的标志蛋白质，但尚有许多可能与该癌症发生相关的蛋白质仍待被鉴定. 1-2-2肾脏癌 蛋白质组学应用 蛋白质组学应用 1-2-3结肠癌 结肠癌是一种常见的癌症.利用双向电泳与免疫转印技术,分析自人类结肠癌细胞粗萃取蛋白质中分离出的一系列蛋白质.并将有意义之蛋白质点切割出,进行蛋白质序列分析以鉴定这些蛋白质。 结果发现 hsp