细菌内毒素检查法讲义全.pptVIP

凝胶半定量试验溶液的制备 编号 内毒素浓度/ 配制内毒素的溶剂 稀释用液 稀释倍数 所含内毒素 的浓度 平行管数 A 无/供试品溶液 检查用水 1 － 2 2 － 2 4 － 2 8 － 2 B 2λ/供试品溶液 2λ 2 C 2λ/检查用水 检查用水 1 2λ 2 2 1λ 2 4 0.5λ 2 8 0.25λ 2 D 无/检查用水 － － － 2 A：没有超过MVD并且通过干扰试验的供试品系列稀释液； B：供试品阳性对照（为确证不存在干扰作用）； C：标准内毒素系列（为确证本试验的操作和环境都符合规定）； D：阴性对照。 凝胶半定量试验－结果判断 当阴性对照溶液D的平行管均为阴性； 供试品阳性对照溶液B的平行管均为阳性； 系列溶液C的反应终点浓度的几何平均值在0.5λ～2λ之间，则试验有效。 若内毒素浓度小于规定的限度，判供试品符合规定。 若内毒素浓度大于或等于规定的限度，判供试品不符合规定。 凝胶半定量试验－结果计算 内毒素浓度 2.0λ λ 0.5λ 0.25λ 终点 标准内毒素系列溶液C ● ● ● ○ 0.5λ ● ● ○ ○ λ 稀释倍数 1 2 4 8 供试品系列溶液A ● ● ● ○ 4×λ ● ● ○ ○ 2×λ 供试品阳性对照溶液B ● ● 阴性对照溶液D ○ ○ CE＝lg-1(ΣX/2)=lg-1[(lg4λ+lg2λ)/2]=2.83λ 例：右旋糖酐20葡萄糖注射液，限值为0.5EU/ml； 通过使用3个鲎试剂厂家的鲎试剂对3个不同厂家的7个样品进行干扰试验证实：右旋糖酐20葡萄糖注射液稀释2倍后即不干扰内毒素检查； 使用灵敏度为0.03EU/ml的鲎试剂对一批右旋糖酐20葡萄糖注射液进行凝胶半定量试验。 MVD＝0.5EU/ml÷0.03EU/ml＝16.67倍 从已确定不干扰的稀释倍数2倍起，再进行1、2、4、8倍稀释(相当于将供试品原液进行了2、4、8、16倍稀释，最终的稀释倍数没有超MVD)。 内毒素浓度 0.06 0.03 0.015 0.0075 终点 标准内毒素系列溶液C ● ● ● ○ 0.015 ● ● ○ ○ 0.03 稀释倍数 1 2 4 8 供试品系列溶液A ● ● ● ○ 4×0.03 ● ● ○ ○ 2×0.03 供试品阳性对照溶液B ● ● 阴性对照溶液D ○ ○ CE＝lg-1(ΣX/2)=lg-1[(lg4λ+lg2λ)/2]=2.83λ＝0.0849EU/ml 如果检验时采用的是供试品的稀释液，则计算原始溶液内毒素浓度时要将结果乘上稀释倍数。 由于检验时采用的是右旋糖酐20葡萄糖注射液的最小不干扰稀释倍数－2倍稀释液，因此计算原始溶液内毒素浓度时要将结果乘上稀释倍数2； 原右旋糖酐20葡萄糖注射液中内毒素含量为： 2×0.0849EU/ml＝0.170EU/ml 如试验中供试品溶液的结果均为阴性，应记为内毒素浓度小于λ（如果检验的是稀释过的供试品，则记录为小于λ乘以该供试品的最低稀释倍数）。 内毒素浓度 0.06 0.03 0.015 0.0075 终点 标准内毒素系列溶液C ● ● ● ○ 0.015 ● ● ○ ○ 0.03 稀释倍数 1 2 4 8 供试品系列溶液A ○ ○ ○ ○ ＜1×0.03 ○ ○ ○ ○ ＜1×0.03 供试品阳性对照溶液B ● ● 阴性对照溶液D ○ ○ 原右旋糖酐20葡萄糖注射液中内毒素含量为：小于2×0.03＝0.06EU/ml 如试验中供试品溶液的结果均为阳性，应记为内毒素浓度大于或等于最大的稀释倍数乘以λ 。 内毒素浓度 0.06 0.03 0.015 0.0075 终点 标准内毒素系列溶液C ● ● ● ○ 0.015 ● ● ○ ○ 0.03 稀释倍数 1 2 4 8 供试品系列溶液A ● ● ● ● ＞8×0.03 ● ● ● ● ＞8×0.03 供试品阳性对照溶液B ● ● 阴性对照溶液D ○ ○ 原右旋糖酐20葡萄糖注射液中内毒素含量为：大于2×8×0.03＝0.48EU/ml 注意事项 实验前，须用肥皂洗手，用75％酒精棉球消毒 实验时须戴口罩、帽子 实验时不高声讲话及频繁走动，防止飞沫及尘埃落入 吸取样品时严禁嘴吸或吹，在使用洗耳球、移液管取样时，应注意不要将洗耳球中的气体吹入溶液中，以防止气体中的内毒素进入供试液 注意事项 注意所用试剂的批号、规格、有效期、灵敏度等信息 溶解鲎试剂及混匀供试品和鲎试剂时，不要剧烈振荡避免产生气泡。 由于凝集反应是不可逆的，所以在反应过程中及观察结果时应注意不要使试管受到振动，以免使凝胶破碎产生假阴性结果。 注意事项 进行干扰实验时，标准对照系列和含内毒素的供试