第10章生产实例抗生素.pptVIP

概述－分子结构及衍生物（4） 6-氨基青霉烷酸（6-aminopenicillanic 6APA）苯乙酰衍生物。 侧链基团不同，形成不同的青霉素 G：苄基青霉素，C6H5CH2-CO-，为主 双氢霉素F：戊青霉素 X：对羟苄基青霉素 F：2-戊烯基青霉素 K：庚青霉素 V：苯氧甲基青霉素 产品：钠、钾、普鲁卡因、二苄基乙二胺 N S CH3 CH3 COOH R CO NH O 青霉素生产菌的生物学特性 产黄青霉：Penicillium chrosogenum 孢子:绿色和黄色 菌落：平坦或皱褶，圆形。 青霉穗:分生孢子链状 深层培养菌丝： 球状和丝状两种。 青霉素的发酵工艺及过程 （一）青霉素的发酵工艺及过程 青霉素的发酵工艺及过程 工艺要点： 1．菌种 产黄青霉，是1943年从美国一位农妇的发霉甜瓜上分离得到的菌种，经改良形成。而Fleninmg分离的点青霉，发酵单位低。目前全世界用于生产青霉素G的菌种，发酵单位可达8500u/ml。 青霉素的发酵工艺及过程 工艺要点： 2．种子制备 以产生丰富的孢子（母斜和米孢子培养）和大量的菌丝体（种子罐制备）为目的，为达这一目的，在培养基中加入比较丰富的、容易代谢的C源（如葡萄糖或蔗糖），N源（如玉米浆）、缓冲pH的以及生长必需的无机盐，并保持最适生长温度（25～26%）和充分的通气、搅拌。 青霉素的发酵工艺及过程 工艺要点： 3．发酵阶段 生长期：菌丝快速生长 生产期：菌丝生长速度降低，大量分泌青霉素。 （1）通过加糖控制来促使青霉素的持续合成（补加葡萄糖）. 青霉素的发酵工艺及过程 工艺要点： 3．发酵阶段 （2）补氮及加前体，补加硫酸铵、氨水、尿素，使发酵液氨氮控制在0.01%～0.05% 。 补前体，在培养基加入一定的苯乙酸，但由于它们对青霉菌有一定的毒性，故一次加入量不能大于0.1%。要采用中间多次补加方式。 青霉素的发酵工艺及过程 工艺要点： 3．发酵阶段 （3）pH控制：6.4～6.6，pH不能超过7.0，因为青霉素G在碱性条件下不稳定。用加葡萄糖来控制或加酸、碱自动控制。 （4）温度控制：一般前期25～26℃，后期23℃。以减少后期发酵液中青霉素的降解破坏。 （5）通气和搅拌 溶氧浓度大于30%饱和度，通气比1:1-0.8VVM。 （VVM系每分钟内每单位体积发酵液通入空气的体积。） 青霉素的提取与精制 从发酵液中提取青霉素，目前工业上主要采用溶剂萃取法。青霉素与碱金属所生成的盐类在水中溶解度很大，而青霉素游离酸易溶解于有机溶剂中。利用这一性质，将青霉素在酸性溶液中转入有机溶剂（醋酸乙酯、氯仿等）中，然后再转入中性水相中。经过这样反复几次萃取，就能达到提纯和浓缩的目的。 提炼工艺过程 青霉素不稳定，遇酸、碱、热分解失活 水溶液中不稳定，非极性溶剂中稳定 易溶于有机溶剂，水中溶解度很小 青霉素盐很稳定；降解产物具有致敏性 防止降解，条件温和、快速。 1、预处理 青霉素的存在部位：发酵液 浓度较低：10－30Kg/M3 含有大量杂质：菌体细胞、核酸、杂蛋白质、细胞壁 多糖等、残留的培养基、色素、盐离子、代谢产物等 目的：浓缩目的产物，去除大部分杂质，改变发酵液 的流变学特征，利于后续的分离纯化过程。 预处理:发酵液加少量絮凝剂沉淀蛋白 2、过滤 鼓式真空过滤机过滤： 一次滤液：pH6.2-7.2，略浑，棕黄或绿色，蛋 白质含量0. 5-2.0%。 板框式过滤机过滤： 硫酸调节pH4.5-5.0，加入0.07%溴代十五烷吡 啶，0.07%硅藻土为助虑剂。 二次滤液：澄清透明，用于提取（收率90％） 3、溶剂萃取 原理：青霉素游离酸易溶于有机溶剂，而 霉素盐易溶于水。 萃取剂：青霉素分配系数高的有机溶剂。 工业上通常用：醋酸丁酯和醋酸戊酯。 除去蛋白质：加0.05-0.1%乳化剂PPB。 萃取：2－3次。 逆流萃取过程 正相萃取：酸化pH1.8-2.0，滤液：醋酸丁酯＝ 1：0.3，碟片式离心机分离（浓缩1.5-2.1） 反相萃取：pH6.8-7.4（磷酸盐、碳酸盐缓冲 液）。把青霉素从丁酯中提取到缓冲液中。 反复萃取2－3次，达到结晶要求。 萃取条件：10℃下。萃取罐冷冻盐水冷却。 4、脱色 萃取液中添加活性炭，除去色素 过滤，除去活性炭。 5、结晶——直接结晶 加醋酸钠