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第二章 微生物的代谢调控与代谢工程 PAGE PAGE 38 第二章 微生物的代谢调控与代谢工程 第一节 微生物代谢的自我调节 微生物代谢是受到高度调节的，如下事实可以说明： 1）微生物生长在含单一有机化合物为能源的合成培养基中，所有大分子单体（如氨基酸）的合成速率同大分子（如蛋白质）的合成速率协调一致，不会浪费能量去合成那些他们用不着的东西。 2）任何一种单体的合成，如能从外源获得并能进入细胞内，单体的合成自动停止，参与这些单体生成的酶的合成也会停止； 3）微生物只有在有某些有机基质（如乳糖）存在时，才会合成异化这些基质的酶； 4）如存在两种有机基质，微生物会先合成那些能异化更易利用的基质的酶，待易利用的基质耗竭才开始诱导分解较难利用的基质的酶； 5）养分影响生长速率，从而相应改变细胞大分子的组成（如RNA含量） 微生物自我调节的部位： 1、养分吸收分泌的通道 大多数亲水分子难于透过细胞膜，需借助一些负责运输的酶系统（如透酶）才得以实现；有些是需能的。 2、限制基质与酶的接近 在真核生物中，各种代谢库的基质分别存在于由胞膜分隔的细胞器内，如在链孢霉中精氨酸存在于细胞质和液泡内，这两处参与精氨酸代谢的酶量有很大的差别。 原核生物的控制方式不同，其中有些酶是以多酶复合物或以细胞膜结合的方式存在，类似于酶的固定化形式，使它不能自由活动。 3、代谢途径通量的控制 微生物控制代谢物流的方法有两种： 调节现有酶的量、改变已有酶分子的活性 微生物自我调节的三个部位实际上也就是三个类型，但都涉及到酶促反应调节。 酶促调节的方式包括酶活性调节和酶合成调节两大类 一、酶活性调节 酶活性的调节方式： 共价修饰、变(别)构效应、缔合与解离、竞争性抑制 1、共价修饰 指蛋白质分子中的一个或多个氨基酸残基与一化学基团共价连接或解开，使其活性改变的作用。 化学基团：磷酸基、腺苷酰基、甲基、乙基等 蛋白质的共价结合部位一般为丝氨酸残基的-CH2OH 共价修饰分可逆和不可逆两种 1）可逆共价修饰 有些酶存在活性和非活性两种状态，它们可以通过另一种酶的催化作共价修饰而互相转换。 如: 糖原磷酸化酶 通过激酶和磷酸酯酶来调节活性 磷酸化形式有活性 ；去磷酸化形式无活性 又如: 大肠杆菌谷氨酰胺合成酶(GS) 12个完全相同亚基(分子量50 000)，排成两层六角环结构; 每个亚基含有催化部位和结合效应物的变构部位; 每个亚基的酪氨酸残基上还能进行可逆的腺苷酰化，完全腺苷酰化可结合12个AMP; 完全脱腺苷酰形式是活性最高的，完全腺苷酰化的是活性最低的; 腺苷酰转移酶(Adenylyl transferase; AT)催化; AT的特异性是由调节蛋白P所控制的，由PA、PD两种形式；PA与AT的复合物催化GS的腺苷酰化, PD与AT的复合物则催化脱腺苷酰反应; 调节蛋白P本身又受到鸟苷酰化和脱鸟苷酰化的可逆共价修饰; 酶可逆共价修饰的意义： 1） 因酶构型的转换是由酶催化的，故可在很短的时间内经信号启动，触发生成大量有活性的酶； 2）这种修饰作用可更易控制酶的活性以响应代谢环境的变化。 这一系统具有能随时响应的特性，因而经常在活化与钝化状态之间来回变换； 需消耗能量，但只占细胞整个能量消耗的一小部分 2）不可逆共价修饰 典型的例子是酶原激活——无活性的酶原被相应的蛋白酶作用，切去一小段肽链而被激活 (胰蛋白酶原的活化靠肠肽酶从其N-端切去一个己肽Val-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys) 酶原变为酶是不可逆的；信号放大；酶完成使命后便被降解，关闭酶活性。 2、变构控制 变构或别构(allosterism)效应是指一种小分子物质与一种蛋白质分子发生可逆的相互作用，导致这种蛋白质的构象发生改变，从而改变这种蛋白质与第三种分子的相互作用。 变构蛋白是表现变构效应的蛋白，如阻遏蛋白；具有变构作用的酶称作变构酶 激活 抑制 两个矛盾的过程 普遍存在于微生物代谢中 大肠杆菌糖代谢中酶的激活剂与抑制剂 酶 激活剂 抑制剂 磷酸果糖激酶 ADP 、GDP PEP 丙酮酸脱氢酶 PEP、AMP、GDP NADH 、乙酰CoA 变构调节机制： 1）变构酶具有一个以上的结合位点，除了结合底物的活性中心外，在同一分子内还有一些分立的效应物结合位点（副位点）； 2）主位点和副位点可同时被占据； 3）副位点可结合不同的效应物，产生不同的效应； 4）效应物在副位点上的结合可随后引起蛋白质分子构象的变化，从而影响