隐球菌抗原检测标准操作规程.doc

隐球菌抗原检测标准操作规程 1．目的 规范隐球菌抗原检测试验标准操作规程。 2.操作授权人 经过培训并通过考核的微生物实验室工作人员。 3.用途： 作为隐球菌病的辅助诊断试验，本检测系统利用简单快速乳胶凝集反应对血清和脑脊液中隐球菌的荚膜多糖抗原进行定性检测。 4．原理 本检测系统利用了包被在乳胶颗粒中的抗隐球菌抗体与含有隐球菌荚膜多糖抗原的样本发生凝集反应。血清中，风湿因子的存在阻碍了此抗原的检测，本实验通过链酶蛋白酶对血清样本的预处理不仅减少了非特异性干扰。而且还加强了对隐球菌荚膜多糖抗原的检测。 5．样本要求 A、脑脊液： 1）常规操作方法收集无菌样本 2）1000g离心15min以确保去除所有白细胞和微粒体 3）小心吸取脑脊液溶液加入无菌容器并密封 4）样本可以立即处理，冷藏，在-20℃冷藏保存。 5）100℃孵育脑脊液要本5min 6）备用 。 B、血液 1）常规操作方法收集全血无菌样本。含抗凝血剂的样本无效 2）1000g离心15min 3）小心吸取血清溶液加入无菌容器密封 4）样本可以立即处理，冷藏，在-20℃冷藏保存。 5）在50ul链酶蛋白酶中加入300ul血清并用密封 6）56℃孵育血清/链酶蛋白酶溶液30min 7）加入一滴链酶蛋白酶抑制液终止反应9）备用。 C、试剂准备 按照提示剂量用蒸馏水或去离子水制备链酶蛋白酶，链酶蛋白酶应该以50ul的量进行分装。 6．操作步骤： 6.1在环状玻片中分别加入25ul隐球菌抗原阳性对照，阴性对照和经过热处理的脑脊液或链酶蛋白酶处理的血清样本于不同的分离环中。 6.2每个环中加入25ul隐球菌乳胶 6.3利用分离的涂药棒彻底混合环中物质 6.4室温下手动旋转或者100rpm（+-25）旋转仪上5min 7.结果判断 阴性 ：无可见团块的均匀颗粒悬浮液 阳性：清晰且明显的颗粒或块状 8.质量控制（有效性）： 乳胶对照：周期性的利用隐球菌抗原阳性对照对隐球菌敏感性进行检测。如果隐球菌乳胶试剂敏感性良好，阳性对照明显。 链酶蛋白酶对照：至少每月一次对冷冻链酶蛋白酶水解活性进行检测，按照血清样本准备用300ul链酶蛋白酶对照替换血清样本进行操作。同时对经过链酶蛋白酶处理的和未经链酶蛋白酶对照通过利用上述实验操作进行检测。未经处理的链酶蛋白酶对照为阳性，经过处理的应为阴性。若后者反应为阳性，则水解活性已经降低，则需要重新制备链酶蛋白酶试液即复水、分装、冷冻和检测。 9..注意事项： 9.1所有试剂仅用于体外诊断 9.2.对人的标本应该按照标准的生物危险品进行处理，预防危害的发生。