大鼠游离甲状腺（FT4）定量检测试剂盒（ELISA）.doc

大鼠游离甲状腺素（FT4）定量检测试剂盒（ELISA） 使用说明书 【大鼠游离甲状腺素（FT4）Elisa试剂盒试剂盒名称】 大鼠游离甲状腺素（FT4）定量检测试剂盒（ELISA） 【大鼠游离甲状腺素（FT4）Elisa试剂盒试剂盒用途】 定量检测大鼠血清、血浆及相关液体样本中游离甲状腺素（FT4）的含量。 【大鼠游离甲状腺素（FT4）Elisa试剂盒检测原理】 本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。将标准品、待测样本加入到预先包被大鼠游离甲状腺素（FT4）单克隆抗体透明酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分，再加入酶标工作液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根过氧化物酶（HRP）催化下转化为蓝色产物，在酸的作用下变成黄色，颜色的深浅与样品中大鼠游离甲状腺素（FT4）浓度呈正相关，450nm波长下测定OD值，根据标准品和样品的OD值，计算样本中大鼠游离甲状腺素（FT4）含量。 【大鼠游离甲状腺素（FT4）Elisa试剂盒试剂盒组成】 1 酶标包被板 12孔×8条 7 显色剂A液 6mL 2 标准品 0.3mL×6管 8 显色剂B液 6mL 3 20倍浓缩洗涤液 25mL 9 终止液 6mL 4 样本稀释液 6mL 10 说明书 1份 5 特殊稀释液 6mL 11 封板膜 2张 6 酶标试剂 6mL 12 密封袋 1个 备注：标准品（1号→6号）浓度依次为：24、12、6、3、1.5、0.75 pmol/L. ? 【大鼠游离甲状腺素（FT4）Elisa试剂盒需要而未提供的试剂和器材】 1、37℃恒温箱 2、标准规格酶标仪 3、精密移液器及一次性吸头 4、蒸馏水 5、一次性试管 6、吸水纸 【大鼠游离甲状腺素（FT4）Elisa试剂盒操作步骤】 1、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡30分钟。 2、配液：用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。 3、加标准品和待测样本：取足够数量的酶标包被板，固定于框架上，分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔，记录各孔位置，在标准品孔中加入标准品50μL；待测样本孔中先加入待测样本10μL，再加样本稀释液40μL（即样本稀释5倍）；空白对照孔不加。 4、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。 5、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板4次（也可用洗板机按说明书操作洗板）。 6、加酶标工作液：每孔加入酶标工作液50μL，空白对照孔不加。 7、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。 8、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板4次（也可用洗板机按说明书操作洗板）。 9、显色：每孔先加入显色剂A 液50μL，再加入显色剂B液 50μL，平板混匀器混匀30s（或用手轻轻震荡混匀30s），37℃避光显色15min。 10、终止：取出酶标板，每孔加终止液50μL，终止反应（颜色由蓝色立转黄色）。 11、测定：以空白孔调零，在终止后15分钟内，用450nm波长测量各孔的吸光值（OD值）。 12、计算：根据标准品的浓度及对应的OD值，计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样本的OD值，在回归方程上计算出对应的样品浓度，也可以使用各种应用软件来计算。最终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。 【大鼠游离甲状腺素（FT4）Elisa试剂盒样本要求】 1、样本不能含叠氮钠（NaN3），因为叠氮钠（NaN3）是辣根过氧化物酶（HRP）的抑制剂。 2、标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能立即试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。 3、样本应充分离心，不得有溶血及颗粒。 【大鼠游离甲状腺素（FT4）Elisa试剂盒注意事项】 1、实验严格按照说明书的操作进行，实验结果判定必须以酶标仪读数为准。 2、酶标包被板开封后如未用完，应立即装入密封袋中加干燥剂保存。 3、建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测，取平均值，以减小实验误差。 4、牢记样本已经稀释5倍，计算结果乘以5才是样本实际浓度。 5、本试剂盒定量范围为0.75-24pmol/L，超过此范围，为标准曲线延伸计算所得，不做为准确定量结果，请用特殊稀释液稀释后测定准确结果（0.75-24pmol/L范围内），乘以总稀释倍数即为样本最终浓度。 6、若显色过浅，可适当延长底物温育时间。 7、为避免交叉污染，标准品、样本和空白对照每加一个就要更换一次吸头；酶标工作液、样本稀释液和底物等公共组分，要悬臂加样