浆膜腔积液有形成分检查显微镜检查法作业指导书.doc

浆膜腔积液有形成分检查显微镜检查法作业指导书 1. 实验原理 在显微镜下对浆膜腔积液有形成分进行计数和分类检查。 2. 标本采集： 2.1 标本种类：浆膜腔积液标本由临床医师行胸腔穿刺术，腹腔穿刺术或心包穿刺术分别采集。 2.2 标本要求：送验标本最好留取中段液体于消毒容器试管或消毒瓶内，常规及细胞学检查约留取2毫升。 2.3 为防止出现凝块，细胞变性、细菌破坏自溶等，除应即时送验及检查外，常规及细胞学检查宜用EDTA·K2抗凝，加留1管不加任何抗凝剂用以观察有无凝固现象。 3. 标本储存：立即送检。 4. 标本运输：室温运输。 5. 标本拒收标准：污染，久置标本。 6. 实验材料： 细胞计数板；红细胞稀释液；瑞氏血细胞染色液，生产厂家：（台资）珠海贝索生物技术有限公司。 7. 实验仪器： 7.1 仪器名称： OLYMPUS 显微镜 7.2 仪器厂家：OLYMPUS 7.3 仪器型号：OLYMPUS CH30 8. 操作步骤 8.1 细胞总数：细胞计数方法与脑脊液相同，计数时应把全部有核细胞（包括间皮细胞）都列入细胞计数中。 8.2 白细胞分类计数应在抽出后立即离心沉淀，用沉淀物涂片经瑞氏染色进行分类。 8.3 观察其它有形成分：结晶：寄生虫，脱落细胞等。 9. 结果判断与分析 9.1 细胞计数：红细胞计数对渗出液与漏液的鉴别意义不大。文献报告恶性肿瘤引起的积液压中血性者占50-85%。当积液中的红细胞大于0.1×1012/L时应考虑可能是恶生肿瘤、肺栓塞或创伤所致，也要考虑结核病和穿刺损伤的可能。红细胞增多时不能使用血细胞分析仪计数，因积液中沉渣会引起假性增加，以及纤维蛋白存在而堵塞计数小孔。白细胞计数对渗出液中和漏出液和鉴别有参考价值。现认为漏出液中的白细胞数常不超过100×106/L，如果超过500×106/L多为渗出液。结核性与癌性积液中的白细胞通常超过200×106/L。而化脓性积液时往往1000×106/L。 9.2 白细胞分类：漏出液中细胞较少，以淋巴及间皮细胞为主。渗出液则细胞较多，各种细胞增加的临床意义如下。 9.2.1 中性分叶核粒细胞增多：常见于化脓性渗出液，细胞总数也常超过1000×106/L。在结核性浆膜腔炎早期的渗出液中，也可见以中性粒细胞增加为主。 9.2.2 淋巴细胞增多：主要提示慢性炎症、如结核、梅毒、肿瘤或结缔组织病所致渗出液。有条件者可测定T细胞亚群，一般积液中T淋巴细胞数大于外周血中T细胞。若胸水中见到浆细胞样淋巴细胞可能是增殖型骨髓瘤。少量浆细胞则无临床意义。 9.2.3 嗜酸性粒细胞增多：常见于变态反应和寄生虫所致的渗出液。此外多次反复穿刺刺激、结核性渗出液的吸收期、人工气胸、手术后积液、系统性红斑狼疮、间皮瘤等积液中嗜酸性粒细胞亦增多。 9.2.4 间皮细胞增多：提示浆膜刺激或受损，该细胞在瑞氏染色后，大小约为15-30μm，圆形、椭圆形或不规则形，核在中心或偏位，多为一个核，也可见两个或多个核者，均紫色，胞质多呈淡蓝色有时有空泡。间皮细胞在渗出液中退变，使形态不规则，还有幼稚型间皮细胞，染色质较粗糙致密，但核仁不易见到，都应注意与癌细胞区别。 9.2.5 其它细胞：炎症情况下，在大量出现中性粒细胞的同时，常伴有组织细胞出现。红斑狼疮细胞可偶见于浆膜腔积液中。在陈旧性出血的积液中可见到含铁的血黄色细胞。 9.3 结晶：胆固醇结晶呈无色透明，缺陷角四方形板状，可见于陈旧的性胸水中脂肪性及胆固醇性胸膜炎的胸炎中，浆膜腔出血后可见到含铁血黄素颗粒。偶见夏科-莱登结晶。 9.4 寄生虫检验：可将乳糜样浆膜腔积液离心沉淀后，将沉淀物倒在玻片上检查有无微丝蚴。包虫病胸水可以检查出棘球蚴的头节和小钩。阿米巴病的积液中可以找到阿米巴滋养体。 9.5 细胞学检查：怀疑恶性肿瘤时可用细胞玻片离心沉淀仪收集积液中细胞，作巴氏或H-E染色，如见有多量形态不规则，细胞胞体大小不等，核偏大并可见核仁及胞质染色较深的细胞应高度重视，认真鉴别。必要时用多克隆或单克隆抗体作免疫组织化学检查。必要时作染色体检查，这是诊断恶性肿瘤有效检查方法之一，阳性率可达75%左右。染色体分析多数为非整倍体，以超过2倍体及多倍体为主。常伴有特殊形态的染色体，如巨大染色体、微小染色体、有时有染色体断裂、移位、镶嵌现象。 10. 质量控制：进行室内工作人员比对分析，要求差异在10％以内。 11. 方法学评价：参见浆膜腔积液化学检查作业指导书。 12. 操作注意事项：浆膜腔积液标本必须立即送验及时检查，放置过久将影响检验结果。 13. 参考文献： 中华人民共和国卫生部医政司编。全国临床检验操作规程（第二版）148-149页。