脑脊液有形成分检查显微镜检查法作业指导书.doc

脑脊液有形成分检查显微镜检查法作业指导书 1. 实验原理 在显微镜下对脑脊液有形成分进行计数和分类检查。 2. 标本采集： 2.1 标本种类：脑脊液，由临床医师进行腰椎穿刺采集，必要时可从小脑延脑池或侧脑室穿刺获得。 2.2 标本要求：将脑脊液分别收集于3个无菌试管中，第一管作细菌培养，第二管作化学分析和免疫学检查，第三管作一般性状及显微镜检查。每管收集1-2毫升。 2.3 遇高蛋白标本时可采用EDTA K2抗凝。 3. 标本储存：立即送检。 4. 标本运输：室温运输。 5. 标本拒收标准：污染，久置标本。 6. 实验材料： 细胞计数板；红细胞稀释液；瑞氏血细胞染色液，生产厂家：（台资）珠海贝索生物技术有限公司。 7. 实验仪器： 7.1 仪器名称： OLYMPUS 显微镜 7.2 仪器厂家：OLYMPUS 7.3 仪器型号：OLYMPUS CH30 8. 操作步骤 8.1 细胞总数 8.1.1 对澄清的脑脊液可混匀后用滴管直接滴入计数池，计数10个大方格内红、白细胞数，其总和即为每μl的细胞数。再换算成每升脑脊液中的细胞数。如细胞较多，可计数一大格内的细胞×10，即得每μl脑脊液中细胞总数。如用升表示，则再乘以106。也可用生理盐水或红细胞稀释液稀释后再用人工计数，或直接用血细胞分析仪进行计数。 8.1.2 浑浊或带血的脑脊液可用血红蛋白吸管吸取混匀的脑脊液20μl，加入含红细胞稀释液0.38ml的小试管内，混匀后滴入计数池内，用低倍镜计数4个大方格中的细胞总数，乘以50，即为每μl脑脊液的细胞总数。 8.2 白细胞数 8.2.1 非血性标本：小试管内放入冰乙酸1-2滴，转动试管，使内壁沾有冰乙酸后倾去之，然后滴加混匀的脑脊液3-4滴，数分钟后，混匀充入计数池，按细胞总数操作中的红、白细胞计数法计数。 8.2.2 血性标本：将混匀的脑脊液用1%冰乙酸溶液稀释后进行计数。为剔除因出血而来的白细胞数，用下式进行校正。 每μl脑脊液内白细胞校正数 每μl脑脊液内红细胞数×每μl脑脊液内白细胞数 =每μl脑脊液内白细胞未校正数－ 每μl血液内红细胞数 例示：血液内红细胞4 000 000/μl； 脑脊液内红细胞20 000/μl； 血液内白细胞10 000/μl； 脑脊液内白细胞60/μl 20 000×10 000 则：60－ =60-50=10 4 000 000 即该患者脑脊液内白细胞之校正数为10。 8.3 细胞分类 8.3.1 直接分类法：白细胞计数后，将低倍镜换为高倍镜，直接在高倍镜下根据细胞核的形态分别计数单个核细胞（包括淋巴细胞及单核细胞）和多核细胞，应数100个白细胞，并以百分率表示。若白细胞少于100个，应直接写出单核、多核细胞的具体数字。 8.3.2 染色分类法：如直接分类不易区分细胞时，可将脑脊液离心沉淀，取沉淀物2滴，加正常血清1滴，推片制成均匀薄膜，置室温或37℃温箱内待干，进行瑞氏染色后用油镜分类。 如见有不能分类的细胞，应另行描述报告，如脑膜白血病或肿瘤时。 寄生虫学检查：经沉淀涂片认真寻找虫卵、幼虫等。 结果判断与分析 质量控制：进行室内工作人员比对分析，要求差异在10％以内。 参考范围 11.1 成人脑脊液内无红细胞，白细胞极少，其参考范围： 腰池中为（0-10）×106/L；脑室内为（0-5）×106/L； 儿童为（0-15）×106/L，新生儿为（0-30）×106/L。 如白细胞达（10-50）×106/L为轻度增加，（50-100）×106/L为中度增加，200×106/L以上显著增加。 11.2 正常脑脊液中白细胞主要为单个核细胞，多为淋巴细胞及大单核细胞，两者之比约为7：3，偶见内皮细胞：软脑膜和蛛网膜细胞、室管膜细胞、脉络膜细胞等。 临床意义 12.1 中枢神经系统感染性疾病时脑脊液根据细胞病理学变化分三个不同时期：①急性炎性渗出期，呈粒细胞反应；②亚急性增殖期，呈激活淋巴细胞或单核-巨噬细胞反应；③修复期呈淋巴细胞反应。化脓性脑膜炎的急性期变化最突出，持续时间最长；此期脑脊液细胞数每微升可高达数千，以中性粒细胞为主，当用抗生素治疗后，脑脊液细胞数迅速下降。梅毒性脑炎亚急性期出现较早，持续时间较长，脑脊液中细胞数轻度增加，以淋巴细胞为主，在单纯疱疹病毒性脑炎的脑脊液淋巴样细胞中可发现胞质内包涵体，结核性脑膜炎时其脑脊液细胞数可增加，但超过500×106/L者较为罕见，在发病初期以中性粒细胞为主，但很快下降，由于患者多在发病数天后才来诊治，因此首次腰穿