蛋白质与核酸相互作用的试验方法学研究知识讲稿.pptVIP

DNA-蛋白质相互作用研究实验;引言;一、凝胶阻滞试验（DNA迁移率变动试验DNA mobility shift assay）;2 主要步骤及内容： 制备探针DNA （P32放射性同位素标记DNA） 同细胞蛋白质提取物一道温育，形成DNA-蛋白质复合物。 将它加样到非变性的聚丙烯酰胺凝胶中，进行电泳分离。 应用放射自显影技术显现具放射性标记的DNA条带位置 ; 凝胶阻滞试验不仅可以用来鉴定在特殊类型细胞的提取物中，是否存在着能够同某一特定DNA片段结合的蛋白质分子(比如特异的转录因子等)，而且还可以用来研究发生此种结合作用之精确的DNA序列的特异性 ;;材料及试剂： 2X结合缓冲液： 20 mM Tris pH 7.5 、100 mM NaCl、2 mM EDTA、10% 甘油、 poly(dI-dC) (5 mg/ml in TE)、 BSA (10 mg/ml)、 P32-标记探针 缓冲液C： 20 mM HEPES pH 7.9、25% glycerol、420 mM NaCl、1.5 mM MgCl2、 0.5 mM 二硫苏糖醇、0.5 mM 苯甲基磺酰氟化物、0.2 mM EDTA 4%天然的聚丙烯酰胺凝胶(50 ml)：5 ml 40% 丙烯酰胺 (30:1)、2.5 ml 5X 四溴乙烷， 41.95 ml H20、0.5 ml 10% A