定量pcr基本原理及方法.pptVIP

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2019-09-08 发布于浙江
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定量pcr基本原理及方法.ppt

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定量PCR基本原理及方法 ;荧光定量PCR基本原理荧光定量PCR标记方法荧光定量PCR不同方法学的应用; ;;阈值：PCR扩增信号进入相对稳定的对数增长期时的荧光值。;logN=log N0 +nlogE n=Ct 每个模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系。利用已知起始拷贝数的标准品作出标准曲线，根据未知样品的Ct值，即可计算出该样品的起始拷贝数。 ;; 内掺式染料 SYBR Green I, LC Green 序列特异性探针 Taqman Molecular Beacons FRET 引物特异性探针 Amplifluor (Intergen) LUX;5’;5’;R;R;Oligo 1: Fluorescein;荧光定量PCR不同方法学的应用; 定量分析（基因拷贝数的绝对定量，基因表达调控的相对定量） Sybr-Green (LC Green), Taqman, Molecular Beacon, etc;某科研用户使用Rotor-Gene 3000进行基因表达检测结果（自备标准品，检测样品做复管）;某科研用户使用Rotor-Gene 3000进行基因表达相对定量分析，下图为用??Ct法得出的分析结果。（自备标准品，检测样品做3次重复复管）;利用溶解曲线进行实验条件的优化（RG3000）; 标记方法; 基因型分析;; ;利用内掺式染料进行高分辨率熔解曲线（HRM）分析基因型 HRM根据序列长度、GC含量和互补性分析样品，可精确到单碱基差异。相比其它方法节约了探针和标记的费用。;谢谢！