蛋白质与酶工程 第五章 酶和细胞固定化.ppt

由于动物细胞的极度敏感性, 植物细胞固定化方法会对动物细胞产生毒性, 另外多糖(如卡拉胶等) 由于具有很高的离子强度也会对细胞产生毒害 故在动物细胞培养中要考虑使用较温和的固定化方法, 如吸附、包埋、中空纤维或胶囊化 2、固定化原生质体 一、原生质体固定化的方法 制备原生质体——将原生质体重新悬浮在含有渗透压稳定剂的缓冲液中配成原生质体悬浮液——包埋法固定化原生质体。 关键：原生质体如何制备？ 二、原生质体的制备 将对数生长期的细胞收集——悬浮在含有渗透压稳定剂的高渗缓冲液中——去细胞壁——分离纯化——得到原生质体——活性鉴定 三、酶解注意要点 1、酶解前要预处理：主要是为了使酶渗透到细胞器中去。 采取的策略：先加入物质抑制或阻止某种细胞壁的成分合成，可以使酶插入。 一般加入：巯基乙醇，Triton-100，甘氨酸、青霉素。 2、酶系选择： 溶菌酶、蜗牛酶、β葡聚糖酶、纤维素酶、半纤维素酶、果胶酶 3、酶浓度选择（0.5%-1%） 4、酶解温度和pH 5、酶解终点确定 四、稳定剂（高渗溶液）要求 1 加入的化合物对细胞和原生质体无毒性 2 不会影响水解酶的活性 3 对代谢产物无不良影响 稳定剂加入操作注意点 1、一定pH （酶和菌体活性最高） 2、一定的浓度（过高浓度原生质体易脱水皱缩） 3、种类：无机盐——细菌 有机物糖和糖醇——酵母 4、