第5章 离子交换层析.pptVIP

离子交换层析的概念 离子交换层析是利用分离物（蛋白质）表面的荷电的离子或基团与带相反电荷的不溶性基质（离子交换剂）进行可逆的交换。 更确切地，是先用蛋白质偶极离子置换基质官能团上的平衡离子（反离子），然后蛋白质本身又随着平衡离子的比例的增加而被置换下来。根据蛋白质各组分所带电荷的性质及电荷量的差异，被置换的速度不同而在层析过程中达到分离。 内容提要 第一节 基本原理 第二节 离子交换剂的分类与性质 第三节 操作 第四节 应用 第一节 基本原理 1.离子交换剂 2.交换反应 3.原理 4.离子交换剂与离子结合的关系 5.两性电解质与离子交换剂的结合力 阴离子交换剂与阳离子交换剂的基本构成：基质－电荷基团－反离子（反离子基团） 3.离子交换层析的原理 What happens in ion exchange? What happens in ion exchange? What happens in ion exchange? What happens in ion exchange? What happens in ion exchange? 4.离子交换剂与离子结合的关系 强酸性离子交换剂、强碱性离子交换剂对各种反离子的结合与否以及结合力的强弱遵循一定的规律；并对样品选择离子交换剂、洗脱液离子类型、pH状态都至关重要。 离子交换剂与各种水合离子的结合力是与离子的电荷量成正比，与水合离子的半径的平方成反比关系。 离子交换剂在溶液中与水合离子结合能力的趋势 结论：离子价数愈高，结合力愈大。 离子间电荷相同时，离子的原子序数愈高，水合离子半径愈小，结合力愈大。 故元素周期表中离子结合力的趋势的方向为：从小至大。(P71表5-1) 5.两性电解质与离子交换剂的结合力 蛋白质、酶、多肽、核苷酸及核酸等两性电解质与离子交换剂的结合力取决于其本身的物理化学性质和在特定pH条件下呈现的离子状态。 当pH﹤pI ,带正电荷，被阳离子交换剂吸附。 pH﹥pI,带负电荷，被阴离子交换剂吸附。 pI离pH愈远，分离物所带电荷越强，越容易被离子交换剂吸附，吸附力强，越难解吸附。 内容提要 第一节 基本原理 第二节 离子交换剂的分类与性质 第三节 操作 第四节 应用 第二节 离子交换剂的分类与性质 离子交换剂的基本要求： 1.高度的不溶性； 2.多孔的结构，巨大的表面积； 3.丰富的交换基团； 4.稳定的物理化学性质。 一、分类 A. 阳离子交换剂是在不溶性载体上,结合有中性pH下带负电荷的官能团（羧甲基或磺丙基基团）。这类树脂适合于分离等电点在中性以上的蛋白质。 三角形代表负电荷的官能团，释放的反离子带正电荷。 阴离子交换剂带正电荷官能团，反离子带负电荷。 B.阴离子交换剂的官能团（二乙氨乙基DEAE或季氨碱QAE）树脂在中性pH条件带正电荷。释放的反离子带负电荷，在中性pH时能与酸性蛋白质相互作用。 离子交换树脂的基本类型 请记住： 阳离子交换剂本身带酸性基团，在其pK以上荷负电。 阳离子分为：强酸性、中强酸性、弱酸性 阴离子交换剂本身带碱性基团，在其pK以下荷正电。 阴离子分为：强碱性、中强碱性、弱碱性 1.疏水性离子交换剂 疏水性离子交换剂中的基质是人工合成的、与水结合力较小的物质，称为树脂。其基质的化学本质是苯乙烯和二乙烯苯合成呈网状的聚合体，引入不同的电荷基团。 疏水性离子交换剂具有如下特性而被广泛应用： 大量的活性基团 较高的交换容量 良好的机械强度 稳定的物理化学性质 均匀的球形颗粒、型号齐全以及丰富的产品 2.亲水性离子交换剂 1）纤维素Sephacel离子交换剂 基本结构: 以微晶纤维素为基质，化学方法引入电荷基团，构成各种阳离子、阴离子交换剂; 示弱阴离子树脂的结构（DEAE-Sephacel） Beaded Cellulose-O-CH2-CH2N+-H-Cl- 2)交联葡聚糖Sephadex离子交换剂 以交联葡聚糖G－25和G－50为基质，化学法引入电荷基团构成各种阴离子、阳离子交换剂。（DEAE-Sephadex、QAE- Sephadex）。 DEAE-Sephadex-O-CH2-CH2-N+-H-Cl- QAE- Sephadex-O-CH2-CH2-N+-CH2-CH(OH)-CH3-Cl- 3)琼脂糖Sepharose离子交换剂 以交联琼脂糖CL-6B为基质，化学法引入电荷基团构成阳离子交换剂 CM－ Sepharose CL-6B和阴离子交换剂 DEAE- Sepharose CL-6B。 CM(Sepharose Cl-6B)-O-CH2-C-02Na+ DEAE- Seph