分子生物学常用仪器技术介绍.pptVIP

因此可以得到一系列不等长度的以ddNTP结尾的四组片段，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE)对长度不等的新生链进行分离后，就可以根据片段大小直接读出新生DNA链的序列。 （二）新生链的荧光标记原理 多色荧光标记法 将荧光染料标记在作为终止底物的双脱氧单核苷酸上。 反应中将4种ddNTP分别用4种不同的荧光染料标记，带有荧光基团的ddNTP在掺入DNA片段导致链延伸终止的同时，也使该片段端标上了一种特定的荧光染料。 经电泳后将各个荧光谱带分开，根据荧光颜色的不同来判断所代表的不同碱基信息。 2. 单色荧光标记法 单色荧光标记法所用荧光染料仅一种，与多色荧光标记法不同的是，单色荧光标记引物法和荧光标记终止底物法均需将A、T、C、G四个反应分别在不同扩增管中进行，电泳时各管产物也分别在不同泳道中电泳。 一、全自动DNA测序仪的检测原理 （三）荧光标记DNA的检测原理 测序反应一般以单引物进行DNA聚合酶延伸反应，绝大多数产物均为单链 反应结束后，样品经简单纯化处理就可以放置到自动测序仪中开始电泳 两极间极高的电势差推动着各个荧光DNA片段在凝胶高分子聚合物中从负极向正级泳动并达到相互分离，且依次通过检测窗口 由激光器发出的极细光束，通过精密的光学系统被导向检测区，在这里激光束以与凝胶垂直的角度激发荧光DNA片段。 一、全自动DNA测序仪的检测原理 （三）荧光标记DNA的检测原理 D