手工抗人球蛋白试验试管法标准操作规程.doc

手工抗人球蛋白试验试管法标准操作规程 (一)检验目的 建立手工抗人球蛋白试验的标准操作规程，确保手工抗人球蛋白试验的规范性和准确性。 (二)检验原理 血液中一些IgG类抗体或补体C。(主要是免疫性抗体)与红细胞表面相应抗原结合后，在盐水介质中不出现肉眼可见的凝集反应，但在加入抗IgG或抗C，抗体后，以其搭桥则出现凝集反应，该试验称之为抗人球蛋白试验，也称Coombs Test。包括直接抗人球蛋白试验(DAT)和间接抗人球蛋白试验(1AT)。 (三)适用范围 1.DAT用于检测红细胞体内致敏情况 (1)新生儿溶血病的诊断。 (2)免疫性溶血性贫血的诊断。 (3)研究药物致敏的红细胞。 (4)溶血性输血反应的研究。 2.IAT用于检测体外致敏红细胞的抗体 (1)IgG类不规则抗体筛查与鉴定。 (2)交叉配血试验。 (3)检查用其他方法不能查明的红细胞抗原。 (4)用于一些特殊研究，如混合凝集反应、白细胞抗体及血小板抗体检测试验。 (四)设备性能参数 参见血清学专用离心机使用说明书。 (五)器材与试剂 1.器材 离心机、塑料软试管、塑料硬质试管(75mm×12mm)、试管架、一次性塑料滴管、记号笔。 2.试剂 生理盐水、抗球蛋白试剂(市售单克隆抗IgG、单克隆抗C3d、抗IgG+C3d)、致敏的阳性对照细胞(自制)。 (六)样本要求 1.患者标本 EDTA-K3或EDTA-K2抗凝全血≥3m1，经B600-A型离心机在1 760g条件下，离心5分钟，离心后无溶血及明显乳糜。紧急情况下可以使用抗凝动脉血。 2.供者标本 枸橼酸盐抗凝，全血量3-5ml，经B600-A型离心机在1 760g条件下，离心5分钟，离心后无溶血、无凝块及明显乳糜。 (七)校准步骤 参照血清学专用离心机使用说明书中的校准要求执行。 (八)操作程序 1.直接抗人球蛋白试验 (1)取2支洁净试管分别加入抗IgG+C3d(可根据需要使用多特异性抗球蛋白)1滴，其中1支试管加1滴受检者3次洗涤后的3％～5％红细胞盐水悬液，另1支试管加2滴正常人AB型血清和1滴3％～5％正常人O型红细胞悬液作为阴性对照，分别混匀。 (2)使用血型血清学专用离心机在1 000g条件下，离心15秒，观察、记录结果。若离心后受检管出现红细胞凝集，同时阴性对照管无凝集，可确定为阳性结果。对于阳性结果可以根据实际需要分别使用抗IgG、抗C3d区分其特异性。若受检标本管中无红细胞凝集(阴性)，则室温孵育5分钟，在离心观察结果，如为阳性则为抗补体反应结果。2次离心均为阴性结果的，在受检管中再加1滴3％～5％IgG致敏细胞的标准O型红细胞悬液，2次离心后观察结果，若出现凝集表明为阴性结果可靠。 2.间接抗人球蛋白试验 (1)按表14-1加入试剂。 (2)混匀，使用血型血清学专用离心机在1 000g条件下，离心15秒，观察、记录结果，阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集则受检管出现凝集为阳性，不凝集为阴性。 3.IgG致敏对照试剂红细胞的制备 (1)取3人份混合的O型RhD阳性红细胞，生理盐水洗涤3次后制成压积红细胞。 (2)在压积红细胞中按每毫升4～6滴的比例添加IgG抗D血清，混匀后37℃孵育15分钟。 (3)生理盐水洗涤4-6次后制成5％红细胞悬液，24小时内使用。 4.检验结果的输入与确认 (1)启动“检验程序”，输入用户名及口令后，进入检验程序。 (2)单击“检验”菜单，选择“检验结果录入／修改”，通过申请序号进行检验结果的录入及修改。 (3)检验结果的确认：检验结果应由实验室负责人或授权人员进行确认，方法为单击“结果处理”菜单，选择“报告确认”进入结果确认，通过选择“工作单元”“报告日期”“单张”或“批量”后，按“提取”键提取已经传输或录入的检验结果，经两人核对无误后按“确认”键进行确认。 (九)质量控制 1.室内质量控制 抗人球蛋白试剂：每日(或使用时)进行试剂质控，具体操作参照《输血相容性检测室内质量控制管理制度》进行。 2.室间质量评价 参加卫生部临检中心组织的全国输血相容性检测室间质量评价活动，可以使用手工抗人球蛋白试验进行交叉配血。 (十)干扰因素 1.过度离心会出现假阳性结果。 2.冷凝集素或异常球蛋白增高会使红细胞出现异常凝集，造成假阳性结果。 3.间接抗人球蛋白试验中洗涤不充分可能造成假阴性。 (十一)结果计算及测量不确定度 不适用。 (十二)生物参考区间