化学生物学分子成像课件.ppt

化学生物学——分子成像;; 分子影像学是医学影像技术和分子生物学、化学、物理学、放射医学、核医学以及计算机科学相结合的一门新的学科。 ; 分子成像是指活体内生物过程在细胞和分子水平上特征的显示，在分子水平上借助化学和生物制剂的作用以无创伤的方式使分子成像。; 临床前疾病的无创检查 制订合适的的治疗方案指导治疗 客观的评价治疗效果 加速药物开发过程; 分子探针与体内特定研究目标结合 定量地反映生物过程中分子水平上变化;;10.1 荧光分子成像 优点： 灵敏度高，10 ～ 10 mol/L 快捷简便 费用低 相对高通量;应用 主要用于动物实验成像。; 1. 标记细胞 （1） 测量各种癌症模型中肿瘤的生长和转移， 对癌症治疗中癌细胞的变化进行实时观测。 （2） 实时观测活体动物体内干细胞造血过程的早期事件及动力学变化。 （3） 细胞凋亡;;细胞凋亡 ;细胞凋亡 ;2. 标记病毒 （1） 病毒侵染用于观察病毒对机体的侵染过程。 （2） 基因治疗可应用荧光素酶基因作为报告基因用于载体的构建，观察目的基因是否能够在试验动物体内持续高效和组织特异性表达。;nibblet a virus engineered to express a green fluorescent protein ;3. 标记细菌（1） 细菌侵染研究（2） 抗生素药物 4. 基因表达和蛋白质相互作用 ;; ;荧光光谱能级跃迁示意图;10.1.2 荧光分子探针 组成 荧光团：决定探针的基本参数。 识别基团： 靶标分子特异结合。 ;荧光探针的参数 （1）斯托克斯位移：决定灵敏度和选择性 发射波长 吸收波长;（2）吸收系数：度量光子吸收效率。 （3）量子产率：反映物质将吸收光转化为荧光效率的参数，直接影响荧光强度。 （4）荧光强度：检测的灵敏度。;荧光寿命 分子的激发电子停留在激发态的平均时间。;2. 荧光探针的分类 小分子荧光探针 荧光蛋白探针 量子点荧光探针 双光子荧光探针;（1）单光子小分子荧光探针 应用范围 金属离子、阴离子、活性氧、糖、核酸、酶、细胞器、生物膜等。;检测金属离子的小分子荧光探针 由配体和荧光团组成;分类 光致电子转移探针（PET） 光致电荷转移探针（PCT） 可检测的离子 K Na Mg Ca Zn;检测阴离子的小分子荧光探针 生物体中大多数酶以阴离子为底物或辅因子。 例子：卤素离子探针 Cl离子在细胞调控、吸收、分泌过程中起到重要的作用，目前使用6-甲氧基喹啉荧光团探针检测。;例子：卤素离子探针 Cl离子在细胞调控、吸收、分泌过程中起到重要的作用，目前使用6-甲氧基喹啉荧光团探针检测。 ;检测活性氧的小分子荧光探针 活性氧是含氧原子的活性分子，包括氧离子、过氧化物、自由基等。;;检测酶活的小分子荧光探针 FRET探针（1-10nm） ;用于细胞结构成像的小分子探针 细胞器识别基团+荧光团;（2）绿色荧光蛋白 水母中发现，在蓝色波长范围的光激发下，发出绿色荧光。;; 238个氨基酸组成，11个β折叠围绕1个α螺旋形成桶状结构，结构使其稳定。 Ex=395nm Em=508nm;;GFP的优点 荧光强 稳定 检测方便 可承受热、碱、长时间光照 荧光团不需辅因子和底物参与; ;; GFP可以与目的基因融合，不影响目的蛋白的空间构象和功能，用于检测目的蛋白的定位、迁移、分子互作、空间构象变化。;;;;mitochondra;live cell realtime ; D. 荧光共振能量传递（FRET）;E. 作为生物传感器 GFP对pH和离子敏感，用于检测细胞的pH和离子浓度。 ;;海葵、珊瑚虫的荧光蛋白;（3）量子点荧光探针 量子点，又可称为纳米晶，是一种由II－VI族或III－V族元素组成的溶于水的无机纳米颗粒。直径一般介于1～10nm之间，电子和空穴被量子限域，受激后可以发射荧光。 ;用途 活细胞成像 肿瘤靶向治疗 疾病诊断; 量子点荧光探针有成千上万个原子构成，通过控制条件实现对直径、性状和结构的调控。; 量子点的紫外可见光谱有很多能级态，允许 单一波长的光同时激发多颜色的量子点。;荧光量子点与生物目标的连接方式;量子点荧光探针优点 激发波长范围宽，同一波长可以激发不同大小的量子点； 量子点的发射波长可以通过调节量子点的大小和组成来改变； 高亮度、稳定的发射荧