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透析 报告人:唐建 自1861年发明透析方法至今已有一百多年。透析已成为生物化学实验室最简便最常用的分离纯化技术之一。在生物大分子的制备过程中,除去盐、除去少量有机溶剂、除去生物小分子杂质和浓缩样品等都要用到透析技术。 透析只需要使用专用的半透膜即可完成。通常是将半透膜制成袋状,将生物大分子样品溶液置入袋内,将此透析袋浸入水或缓冲液中,样品溶液中的大分子量的生物大分子被截留在袋内,而盐和小分子物质不断扩散透析到袋外,直到袋内外两边的浓度达到平衡为止。保留在透析袋内未透析出的样品溶液称为保留液,袋(膜)外的溶液称为渗出液或透析液。 透析的动力是扩散压,扩散压是由横跨膜两边的浓度梯度形成的。透析的速度反比于膜的厚度,正比于欲透析的小分子溶质在膜内外两边的浓度梯度,还正比于膜的面积和温度,通常是4℃透析,升高温度可加快透析速度。 透析膜可用动物膜和玻璃纸等,但用的最多的还是用纤维素制成的透析膜,目前常用的是美国Union Carbide (联合碳化物公司)和美国光谱医学公司生产的各种尺寸的透析管,截留分子量MwCO(即留在透析袋内的生物大分子的最小分子量,缩写为MwCO)通常为1万左右。 透析袋的使用方法 商品透析袋制成管状,其扁平宽度为23 mm~50 mm不等。为防干裂,出厂时都用10%的甘油处理过,并含有极微量的硫化物、重金属和一些具有紫外吸收的杂质,它们对蛋白质和其它生物活性物质有害,用前必须除去。可先用50%乙醇煮沸1小时,再依次用50%乙醇、0.01 mol/L碳酸氢钠和0.001 mol/L EDTA溶液洗涤,最后用蒸馏水冲洗即可使用。实验证明,50%乙醇处理对除去具有紫外吸收的杂质特别有效。使用后的透析袋洗净后可存于4℃蒸馏水中,若长时间不用,可加少量NaN2,以防长菌。洗净凉干的透析袋弯折时易裂口,用时必须仔细检查,不漏时方可重复使用。 新透析袋如不作如上的特殊处理,则可用沸水煮五至十分钟,再用蒸馏水洗净,即可使用。使用时,一端用橡皮筋或线绳扎紧,也可以使用特制的透析袋夹夹紧,由另一端灌满水,用手指稍加压,检查不漏,方可装入待透析液,通常要留三分之一至一半的空间,以防透析过程中,透析的小分子量较大时,袋外的水和缓冲液过量进入袋内将袋涨破。含盐量很高的蛋白质溶液透析时,体积增加50%是正常的。为了加快透析速度,除多次更换透析液外,还可使用磁子搅拌。透析的容器要大一些,可以使用大烧杯、大量筒和塑料桶。小量体积溶液的透析,可在袋内放一截两头烧圆的玻璃棒或两端封口的玻璃管,以使透析袋沉入液面以下。 检查透析效果的方法 用1% BaCl2检查(NH4)2SO4,用1% AgNO3 检查NaCl、KCl等。 为了提高透析效率,还可以使用各种透析装置。使用者也可以自行设计与制作各种简易的透析装置。美国生物医学公司(Biomed Instruments Inc.)生产的各种型号的透析器,由于使用对流透析的原理,使透析速度和效率大大提高。 血液透析 透析的目的是为了取代肾脏的排泄功能。透过人工方法,我们希望把多余的水份和无用的溶质排出体外。 在血液透析过程中,病人的血液通过人工肾脏 – 透析器在体外循环。原则上,透析器有两个由一块薄膜分隔的腔室,其中一个注入血液,另一个注入透析液。薄膜是半透性的,因此只可让水份和特定大小的溶质通过。体外循环是受到血液透析机器监控,而血液透析机也同时配制透析液。 当治疗开始,病人的血液内含有多余的水份和废物。为了清除过多的液体,便需利用透析器中薄膜两侧之间的压力梯度。压力梯度或超滤促使水份穿过薄膜,以离开血液并进入透析液。整个治疗过程所超滤出的水份容量须与体内多余的水量相等。 由于透析液中是不含有废物如尿素等,因此能在薄膜两侧之间产生一个浓度梯度差异。浓度梯度差使血液中的废物随扩散(弥散)作用离开血液,穿过薄膜并进入透析液。 治疗的结果是病人的血容量得到调整,而血液中的废物也得到清除。 (一)透析中低血压 (二) 肌肉痉挛 (三) 恶心和呕吐 (四) 头痛 (五) 胸痛和背痛 (六) 皮肤搔痒 (七) 失衡综合症 (八) 透析器反应 (九) 心律失常 (十) 溶血 (十一)空气栓塞 (十二) 发热 (十三)透析器破膜 (十四) 体外循环凝血 腹膜透析 是利用腹膜作
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