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衣原体细胞培养法 细胞培养步骤： 制备致密单层细胞。以Hela-299细胞为例，六孔板每孔接种75万细胞，孵育24小时； 以30ug/ml DEAE-葡聚糖处理细胞30min，提高细胞膜内吞能力； 弃掉DEAE-葡聚糖，换5ml未加血清的培养液，加入菌液。菌液的量要根据菌液浓度而定，过高会造成细胞病变过快，提前大量死亡，过少会造成阳性率过低，无法观察或计数； 六孔板3000rpm 1238g 离心。通过物理作用加速促进衣原体进入细胞。有文献报道，通过离心可以提高感染效率100倍； 衣原体细胞培养法 孵箱中孵育两小时，提供衣原体进一步感染的时间，也给细胞一个回复状态的时间。 更换感染液：细胞培养液+1μg/mL放线菌酮。 48~72小时碘染色或Giemsa染色或Macchavello染色观察结果。 衣原体细胞培养法 衣原体细胞培养法 特异性100%和敏感性80%~90%。被认为是CT检测的“金标准” 分离培养操作复杂，技术要求高，所需时间长 标本敏感性受标本采集、运送、保存等的影响较大 各实验室技术水平不同，标准化难度大 多用于科研和临床疑难病例的最终鉴定 胶体金法 胶体金法 衣原体标本预处理后与胶体金标记抗体及二抗结合 优点：快速简单，半小时内出结果，易于观察判断； 缺点：敏感性低、不能定量检测；不同公司试剂和同一公司试剂批间差异大。 酶免疫测定（EIA） 用ELISA方法，使用酶标记的单克隆或多克隆抗体检测CT的可溶性抗原。常用脂多糖（LPS）单克隆抗体或多克隆抗体进行检测。 酶免疫测定（EIA） 敏感性为64%~98%，特异性为93%~98% 简便。适用于自动化。适于短时间内大批量标本的检测 与其它微生物感染偶有交叉反应，如金黄色葡萄球菌、淋病奈瑟菌、A群、B群链球菌等。 沙眼衣原体检测新进展 杨会林 衣原体Chlamydia 一类能通过细菌滤器，专性真核细胞内寄生，有独特发育周期的微生物； 体积略大于病毒，光学显微镜下可见，具有DNA、RNA两种核酸、核糖体和近似细胞壁的膜； 以二分裂方式进行增值； 能被抗生素抑制，现归于广义的细菌范畴。 沙眼衣原体C. trachomatis 具有特殊发育周期，镜检可观察到两种不同形态结构： 1.原体（EB）：存在于细胞外，具有高度感染性 2.始体（RB）：存在于细胞内，繁殖型，代谢活泼，无感染性 衣原体分类 按第九版Bergey细菌学分类手册，衣原体分类上属于衣原体目（Chlamydiales）,下有衣原体科（Chlamydiceae）、衣原体属(Chlamydia)。 根据衣原体的抗原结构和DNA同源性特点，衣原体分为四个种，包括沙眼衣原体（C. trachomatis）、肺炎衣原体（C.pneumoniae）、鹦鹉热衣原体（C.psittaci）和家畜衣原体（C.pecorum）。前三种对人致病，以沙眼衣原体（CT）常见。 沙眼衣原体C. trachomatis 分A、B、Ba、C、D、Da、E、F、G、H、I、Ia、J、K、L1、L2、L2a、L3等18个血清型，不同血清型能引起不同疾病。分3个生物型，即小鼠生物型、沙眼生物型和性病淋巴肉芽肿型。后两者与人类疾病相关。 CT抗原结构 属特异性抗原：衣原体胞壁脂多糖（LPS） 识别表位位于2-酮基-3-脱氧辛酸（KDO）三糖 可与肠道菌Re突变株发生交叉反应 种特异性抗原：主要外膜蛋白（MOMP），可进行补体结合试验和中和试验检测 型特异性抗原：位于MOMP上 沙眼衣原体(CT)感染 感染眼结膜引起沙眼，包涵体结膜炎； 沙眼衣原体是性传播疾病的主要病原体。在男性主要引起非淋菌性尿道炎或可合并附睾炎、前列腺炎、性病淋巴肉芽肿等；在女性可引起尿道炎、宫颈炎、输卵管炎、盆腔炎等。严重患者可导致不孕及异位妊娠； 能通过性接触或非性接触方式感染新生儿、儿童，引起新生儿肺炎和新生儿包涵体结膜炎，给预防沙眼衣原体感染带来很大困难。 沙眼衣原体(CT)感染 沙眼衣原体感染 沙眼衣原体感染 沙眼衣原体(CT)感染 常与淋病奈瑟菌混合感染（50%）。淋病奈瑟菌对衣原体繁殖起着激活和促进作用。衣原体感染能增加人群获得HIV的概率。 最近有研究提出，CT感染能提高患癌症风险。CT感染可破坏p53蛋白，增加突变细胞存活的风险，最终引发癌症。 沙眼衣原体感染流行病学 传播途径：通过性接触传播，母婴垂直传播，接触沙眼患者的毛巾、不洁洗脸水和脸盆传播； 在女性宫颈炎和男性尿道感染中，临床上常表现为无症状，呈隐性感染，成为携带者，更易导致感染传播。 沙眼衣原体感染流行病学 据世界卫生组织估计，每年有9200万新发的沙眼衣原体感染病例。 在美国，Datta SD