利用小鼠D-半乳糖衰老模型.PPT

慢性槲皮素增强小鼠空间学习记忆 摘要 以往研究发现，引起脑老化的神经系统增龄性退行性变化与学习记忆能力衰退存在一致性．老龄动物的学习记忆能力下降，探究反应减弱，自发行为减少． 利用小鼠D-半乳糖衰老模型，通过Morris水迷宫动物行为实验和小鼠皮层与海马组织还原型谷胱甘肽和羟自由基含量测定等生化指标实验，对槲皮素延缓脑衰老作用进行了研究． 槲皮素 1.分布 槲皮素是一种在植物界分布很广的具有多种生物活性的黄酮类化合物． 广泛存在于蔬菜和水果之中，如洋葱、马铃薯、卷心菜、生菜、苹果、芒果和黑加仑等 多种中草药中也含有槲皮素． 2.功能 扩张冠状血管，降低血脂，抗血小板聚集，抗炎、抗过敏，抗糖尿病并发症，防止冠心病、心率失常，抗氧化、清除自由基，以及抗癌、抗肿瘤等药理作用． 3.化学结构 槲皮素的化学名为3,5,7,3’,4’-五羟基黄酮，多酚类化合物，化学式C15H10O7，分子量302.24 槲皮素具有很强的抗氧化和清除自由基的能力 槲皮素及其衍生物具有亲水性和亲脂性，其主要的抗氧化活性基团是酚羟基 实验材料 槲皮素、D-半乳糖，甘露醇、蔗糖和EDTA，还原型谷胱甘肽试剂、羟自由基试剂 雄性小鼠50只随机分笼饲养，每笼10只小鼠，室温控制在(22±1)℃，在12h明暗环境条件下饲养，自由喂食、饮水． 实验方法 Morris水迷宫实验 小鼠脑组织匀浆的制备 脑组织中还原型谷胱甘肽(GSH)的测定 脑组织中羟自由基(OH-)的测定 实验时将其中4组小鼠每天颈后皮下注射 用药8周后，将5组小鼠分别进行行为测试和生化指标测试． 1.Morris水迷宫实验 小鼠水迷宫为直径120cm，高50cm的圆形水池，周围放有视觉提示物体． 水迷宫分为东南、西南、东北、西北4个象限，其中一个象限之中置一平台，平台高15cm，表面直径为6cm，水面高出平台1cm 水中加入黑色食用色素，使动物在水面不能看见水下平台． 实验时将小鼠随机从一个象限面向池壁放入水迷宫，通过迷宫上方的摄像头和图像采集系统记录小鼠找到平台休息的运动轨迹． 每天进行4次游泳训练，每次令动物从不同的象限入水．对第1天在60s内未找到平台的小鼠，人为引导其找到平台，以后几天记录的最长时间为60s，持续实验6天. 第7天，去掉平台，将小鼠随机从一个象限面向池壁放入迷宫，记录小鼠90s内穿越原平台位置的次数． 2.小鼠脑组织匀浆的制备 取小鼠，迅速断头，在冰块上分离出新皮层和海马，用4℃生理盐水冲洗干净 置于玻璃匀浆器中，加入脑组织重量9倍的冷生理盐水，在冰水浴中匀浆，充分研磨，使组织块匀浆化． 3.脑组织中还原型谷胱甘肽(GSH)的测定 考马斯亮蓝法测定蛋白质含量： 取脑组织匀浆1mL，加入0.25mol／L pH8.0的Tris-HCl 缓冲液3mL，再加入1mL 3％甲醛，混匀，室温下分别准确静置60min 取1mL加入预先恒温于25℃水浴中的5mL DTNB分析溶液，混匀，静置5 min后，于波长412nm处测定吸光．计算每毫克蛋白质中GSH的含量． 4.脑组织中羟自由基(OH-)的测定 通过比色法检测抗氧化物质总抗氧化以及清除活性氧能力． Fenton反应产生的OH-量与H202的量成正比，当用Gress试剂显色时，形成红色物质，其呈色与OH-的多少成正比关系．利用这一原理，进行清除活性氧能力的测定． 羟自由基测试盒为活性氧试剂盒，使样本产生羟自由基，其测试结果显示组织抗氧化能力的大小． 计算公式:总抗氧化能力=(测定管A-对照管A)×反应液(mL)×样品测试前稀释倍数÷0.01÷30÷取样量(mL)． 数据统计处理 所有实验数据均经一元方差分析过程进行单变量方差分析． 实验结果 1.槲皮素对D-半乳糖处理小鼠Morris水迷宫实验的影响 游泳速度随时间的变化 到达平台路程长度随时间的变化 小鼠水迷宫第六轮试验时小鼠潜伏期的变化 小鼠水迷宫第六轮实验时游泳平均速度的变化 数值示每组鼠从4个入水点到达平台的平均值 与Dgal组比较：* 表示P0.05 **表示P0．01 与Young组相比较：﹟表示P0.05,﹟﹟表示 P0.01,﹟﹟﹟表示P0.001 在第五轮和第六轮训练中 青年组小鼠 70％可找到平台 灌喂槲皮素100 mg／kg 41.32％ 灌喂槲皮素75 45.45％ 灌喂槲皮素50 18.18％ D-半乳糖衰老组 8.33％ 除平台后小鼠在原平台所在象限游泳时间占总游泳时间的百分比 数值示平均值±标准误 与Dgal组比较:**示P0.01 ***示P0．001 与Y