动物细胞培养和核移植技术2动物细胞融合和单克隆抗体理论基础.PPTVIP

* 第二章、 细胞工程 一、植物细胞工程 1、基本技术: (1)植物组织培养 (2)植物体细胞杂交技术 2、实际应用 二、动物细胞工程 1、动物细胞培养和核移植技术 2、动物细胞融合和单克隆抗体 理论基础（原理）：细胞全能性 全能性表达的难易程度：受精卵＞生殖细胞＞干细胞＞体细胞；植物细胞＞动物细胞 植物组织培养 （1）离体的植物器官、组织或细胞 ―→愈伤组织 ―→胚状体、或丛芽 ―→试管苗 脱分化 再分化 （2）条件：无菌和温度适宜 营养：无机营养，有机营养 激素：生长素，细胞分裂素 植物组织培养的目的：是得到更多的植物体， 植物细胞培养的目的是：获得人类所需的细胞 植物体细胞杂交技术 （2）去壁：纤维素酶，果胶酶 诱导融合的方法：物理法包括离心、振动、电刺激等。 化学法用聚乙二醇（PEG）作为诱导剂。 （3）意义：克服了远缘杂交不亲和的障碍。 （1）原理：细胞膜的流动性和细胞的全能性 （2）基础：植物组织培养 （3）过程： 筛选 1、微型繁殖：保持优良性状，高效快速 2、作物脱毒：植物的分生区（茎尖、根尖） 3、人工种子：胚状体+人工种皮 4、单倍体育种：后代稳定遗传。缩短育种年限 5、突变体：培育新品种 6、细胞产物的工厂化生产：培育到愈伤组织 （2）动物细胞培养的流程： 取动物组织块（动物胚胎或幼龄动物的器官或组织） 剪碎 用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞 制成细胞悬液 转入培养瓶中进行原代培养（10代以内） 贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续传代培养。 （ 10-50代，核型正常） 1. 动物细胞培养（其他动物细胞工程的基础） （1）概念：动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织， 将它分散成单个细胞， 然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和繁殖。 （3）细胞贴壁和接触抑制：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。 细胞数目不断增多，当贴壁细胞分裂生长到表面相互抑制时， 细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。 （4）动物细胞培养需要满足以下条件 ①无菌、无毒的环境：培养液应进行无菌处理。 通常还要在培养液中添加一定量的抗生素，以防培养过程中的污染。 此外，应定期更换培养液，防止代谢产物积累对细胞自身造成危害。 ②营养：合成培养基成分：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。通常需加入血清、血浆等天然成分。 ③温度和pH：适宜温度：哺乳动物多是36.5℃＋0.5℃； pH：7.2～7.4。 ④气体环境：95%空气＋5%CO2。O2是细胞代谢所必需的，CO2的主要作用是维持培养液的pH。 2.动物体细胞核移植技术和克隆动物 （1）原理：动物细胞核全能性 （2）哺乳动物核移植：胚胎细胞核移植（比较容易） 体细胞核移植（比较难）。 （3）过程： 胚胎移植 核移植 （4）体细胞核移植技术的应用： ①加速家畜遗传改良进程，促进良畜群繁育； ②保护濒危物种，增大存活数量； ③生产珍贵的医用蛋白（生物反应器）； ④作为异种移植的供体； ⑤用于组织器官的移植等。 （5）体细胞核移植技术存在的问题： 克隆动物存在着健康问题、表现出遗传和生理缺陷等