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皮肤致敏试验 原理 具有致敏作用的化学物经一定途径进入机体，与组织蛋白结果形成完全抗原，刺激免疫活性细胞产生致敏淋巴细胞或体液抗体；经1~2周致敏期，使体内免疫反应得到充分发展，形成一定数量的致敏淋巴细胞或特异抗体。当再次接触（激发）时使机体对该化学物产生感受性增高的状态，以一定的异常形式表现出来。 实验内容 1、健康实验动物的选择。 2、实验动物称重、编号和随机分组方法。 3、动物脱毛操作技术。 4、毒性症状的观察和结果评价。 实验器材 1、实验动物：豚鼠 2、注射器、手术剪、容量瓶、动物秤、电推子。 3、阳性致敏物2, 4-二硝基氯化苯配成1%的致敏浓度。 操作步骤 1、实验动物 一般选用白色（纯化）豚鼠，体重200~300g，雄、雌均可，但雌性动物不能发生过性行为。试验组用动物13~20只，对照组至少10只。在同一次试验中，应使用同一性别动物。如果使用两种性别动物，则应雄、雌各半。试验前动物应在实验动物室至少喂养3d，以适应环境和淘汰不合格动物。 试验步骤 （1）诱导（致敏）染毒：试验前24h在动物背部左侧去毛备皮3cm×3cm，将配制好的液体受试物0.2ml，涂在去毛区皮肤上。应注意不要使受试物流到未去毛的皮肤，以1层油纸（或玻璃纸）和2层大于备皮面积的纱布覆盖，再医用胶布（或其他无刺激胶布）封闭固定6h，用清水或无刺激溶剂（或清洁剂），洗去残留的受试物。在第7d和第14d以同样方法重复进行一次。 （2）激发染毒：末次诱导后14~28d进行。试验前24h在动物背部右侧去毛备皮3×3cm2， 按预试验确定的激发浓度用受试物染毒，方法同诱导染毒。在受试物没有皮肤刺激性时，液体取受试物0.1ml，固体粉末取受试物0.1g，敷贴于备皮区，用油纸和纱布覆盖，胶布封闭固定6h，用清水或无刺激溶剂（或清洁剂）洗去残留的样品。必要时，也可用丙酮作为赋形剂（仅限激发染毒）。 试验需设阴性对照组。该组不做诱导染毒，仅以受试物进行激发染毒。 观察症状：一般于激发染毒后每天观察皮肤反应至12d，主要观察皮肤有无红斑水肿。如果无致敏结果，可再次激发以确定。 结果评价 激发染毒后24h和48h观察皮肤反应，按照表1评分。 当受试物组动物出现皮肤反应积分≥2时，判为该动物皮肤变态反应阳性，按表2判定受试物的致敏强度。 表1 变态反应试验皮肤反应评分 皮肤反应 积 分 红斑和焦痂形成 无红斑 0 轻微红斑（勉强可见） 1 明显红斑（散在或小块红斑） 2 中度-重度红斑 3 严重红斑（紫红色）至轻微焦痂形成 4 水肿形成 无水肿 0 轻微水肿（勉强可见） 1 中度水肿（皮肤隆起轮廓清楚） 2 重度水肿（皮肤隆起约1mm或超过1mm） 3 最高积分 7 表2 致敏率强度分级表 致敏率 致敏强度 0~8 弱致敏物 9~28 轻度致敏物 29~64 中度致敏物 65~80 强度致敏物 81~100 极强致敏物