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荧光探针专题知识讲座 荧光探针就是以荧光物质作为指示剂,并在一定波长光的激发下使指示剂产生荧光,通过检测所产生的荧光实现对被检测物质的定性或者定量分析。 荧光探针受到周围环境的影响，使其发生荧光发射发生变化，从而使人们获知周围环境的特征或者环境中存在的某种特定信息。 什么是荧光探针？ 荧光探针的优点 灵敏度高 选择性好 使用方便 成本低 不需预处理 不受外界电磁场影响 远距离发光 特别是在分子生物学、生物化学、医学等领域中有较广泛的应用。 荧光分子探针的结构 荧光分子探针通常由三部分组成： 识别基团（receptor） 荧光基团（fluorophore） 连接体部分（spacer） 识别基团决定了探针分子的选择性和特异性，荧光基团则决定了识别的灵敏度，而连接体部分则可起到分子识别枢纽的作用。 荧光基团和识别基团二者连接在同一个共轭体系中，荧光基团是该体系中最基本的组成部分，一般为芳香族的稠环化合物，其目的是将分子识别转换成不同形式的荧光信号，如荧光强度的增强或减弱、荧光寿命的变化、光谱的移动等。识别基团是为了实现这一选择性识别而合成的探针结构单元，是决定荧光分子探针和被检测体结合的灵敏度与选择性的部分，通常也称为受体。 香豆素作为荧光基团的，邻氨基苯硫醚作为识别基团，两者以席夫碱相连，加入锌离子后，与硫醚上的硫原子、席夫碱上的氮原子及香豆素上的氧原子配位得到结构2，抑制了席夫碱上C=N键的旋转，实现了荧光从无到有的变化 锌离子荧光探针 新型荧光探针---分子信标 分子信标是一种基于荧光能量转移原理而设计的发夹型寡聚核酸荧光探针。它通过与核酸等靶分子相互作用后发生构象的变化而产生荧光信号，对靶分子的检测具有灵敏度高、选择性强、适合于活体实时检测等优点。分子信标技术的建立正是满足了人们 迫切需要一种具有高灵敏度和高亲和力的生物分子探针的需求，因而这种技术很快就广泛地应用于基础医学和生物学等诸多领域。 分子信标是一种由寡聚核酸形成的发夹型分子。它包括一个环，环由与靶分子互补的核酸碱基序列组成；干为两列互补的碱基序列，在分子信标中，荧光基团共价地连接在其干部分的一个末端，猝灭基团也靠共价键连接在干部分的另一末端。 分子信标未与靶分子结合时，由于干部分两列互补碱基对之间的氢键连接，使得荧光基团与猝灭基团距离很近，荧光基团将能量转移给猝灭基团而发生荧光猝灭；当分子信标与序列互补的靶分子结合时，环与靶序列杂交而形成了比干部分更长更稳定的碱基对氢键连接，分子信标发生构型的变化，干部分被打开，从而使荧光基团远离猝灭基团，荧光基团产生的荧光得到几乎100%恢复，且所检测到的荧光强度与溶液中靶标的量成正比。 经典分子信标结构