基因诊断跟基因治疗资料.pptVIP

第 二 十 一 章 基因诊断与基因治疗 Genetic Diagnosis and Gene Therapy 第一节 基因诊断Gene Diagnosis 基因诊断的基本内容 检测个体基因序列特征 基因突变分析 测定基因拷贝数 基因表达产物分析 测定是否存在外源基因 二、基因诊断常用技术方法 限制性内切酶谱分析法 DNA限制性长度多态性(restriction fragment length polymorphism, RLFP)分析 等位基因特异寡核苷酸探针(allele specific oligonucleotide, ASO) （四）基因芯片 基因芯片(gene chip)（又称DNA芯片、生物芯片）通过与一组已知序列的核酸探针杂交进行核酸序列测定的方法，在一块基片表面固定了序列已知的八核苷酸的探针。当溶液中带有荧光标记的核酸序列与基因芯片上对应位置的核酸探针产生互补匹配时，通过确定荧光强度最强的探针位置，获得一组序列完全互补的探针序列。据此可重组出靶核酸的序列。 应用领域:基因表达谱分析、基因突变及多态性分析、基因组文库作图、疾病诊断和预测、药物筛选、基因测序等。 三、基因诊断的应用 遗传性疾病 肿瘤 感染性疾病，传染性流行病 判断个体疾病易感性 器官移植组织配型 法医学中个体识别、亲子鉴定 第二节  基因治疗Gene Therapy 1、主要来自莫洛尼氏小鼠白血病病毒（Moloney murine leukemia virus，MoMLV）其中三个结构基因（gag、pol、env）被删除 2、标记基因（marker gene）插入空缺，供阳性选择用。如：新霉素抗性基因（neomycin resistant gene），该基因编码新霉素磷酸转移酶Ⅱ（NPTⅡ），能对抗新霉素（G418）。 3、有目的基因的插入位点 逆转录病毒载体的构建 * 目 录 * 目 录 基因变异致病类型 内源基因的变异 由于先天遗传背景的差异和后天内、外环境的影响，人类的基因结构及其表达的各个环节都可能发生异常，从而导致疾病。 外源基因的入侵 如各种病原体感染人体后，其特异的基因被带入人体并在体内增殖而引起各种疾病。 一、基因诊断的概念、内容和特点 定义: 利用现代分子生物学和分子遗传学的技术和方法，直接检测基因结构及其表达水平是否正常，从而对疾病作出诊断的方法。 前提条件： 已明确疾病表型与基因型的关系。 特点: 1.以基因作为检查材料和探查目标，属于“病因诊 断”，针对性强。 2.分子杂交技术选用特定基因序列作为探针，故具有很高的特异性。 3.由于分子杂交和聚合酶链反应（PCR）技术都具有放大效应，故诊断灵敏度很高。 4.适用性强，诊断范围广。 5.检测外源基因时，可以检测出潜伏的病原体。 基因变异致病类型 内源基因的变异 由于先天遗传背景的差异和后天内、外环境的影响，人类的基因结构及其表达的各个环节都可能发生异常，从而导致疾病。 外源基因的入侵 如各种病原体感染人体后，其特异的基因被带入人体并在体内增殖而引起各种疾病。 （一）核酸分子杂交技术 × MstⅡ酶切位点(GCTNAGG) 5′ 3′ 正常基因 5′ 3′ 突变基因 1.15kb 1.35kb 镰状红细胞贫血患者基因组的限制性酶切分析 + ﹣ 0.2kb 1.15kb 1.35kb 正常人 突变携带着 患者 镰状红细胞贫血患者基因组的限制性酶切分析 在人类基因组中，平均约200对碱基可发生一对变异，中性变异导致个体间核苷酸序列的差异，称为DNA多态性。不少DNA多态性发生在限制性内切酶识别位点上，酶解该DNA片段就会产生长度不的片段，称为限制性片段长度多态性。在某一特定家族中，如果某一致病基因与特异的多态性片段紧密连锁，就可利用这一多态性片段作为一种“遗传标志”，来判断家庭成员或胎儿是否为致病基因的携带者。 DNA限制性片段长度多态性（RFLP） RLFP分析法 （二）聚合酶链反应 (PCR) PCR/单链构象多态性分析 (single strand conformation polymorphism, SSCP) PCR产物变性后，经聚丙烯酰胺凝胶电泳，正常基因和变异基因的迁移位置不同，借此可分析确定致病基因的存在。 正常人 纯合突变 杂合突变 Leber 病患者 PCR/SSCP分析 + ﹣ PCR/等位基因特异寡核苷酸探针(allele specific oligonucleotide， ASO) （三）基因测序 即测定DNA序列的技术。分离患者的有关基因，测定出碱基排列顺序，找出其变异所在，是最确切的基因