乙肝疫苗的制备课件.pptVIP

乙肝疫苗的制备;基因工程定义：又称为重组DNA技术，指将某些特定的基因或DNA片断，通过载体或其它手段送入受体细胞，使它们在受体细胞中增殖并表达的一种遗传学操作。是生产出符合人类需要的产品或创造出生物的新性状并能稳定遗传。作用：可把来自任何生物的基因转移到与其毫无关系的任何其他受体细胞中，可以任意改造生物的遗传特性，创造出生物的新性状。某一段DNA可在受体细胞内进行复制，为制备大量纯化的DNA片段提供了可能.;;蛋白质名称 用 途 促肾上腺皮质激素（adrenocorticotrophic hormone） 治疗风湿（rheumatic disease） B细胞生长因子（B-cell growth factor） 治疗免疫系统功能失调 降钙素(calcitonin) 治疗软骨病(osteomalacia) 集落刺激因子(colony stimulating factor) 治疗血液病、肿瘤辅助治疗 绒毛膜促性腺激素(chorionic gonadotropin) 治疗不排卵症 内啡肽和脑啡肽(endorphine and enkephalin) 镇痛剂(analgesic agent) 上皮生长因子(epidermal growth factor) 促进伤口愈合 红细胞生成素(erythropoietin) 治疗贫血(anemia) 凝血因子Ⅷ(factor Ⅷ) 治疗血友病(hemophilia) 凝血因子Ⅸ(factor Ⅸ) 治疗血友病 生长激素(growth hormone) 促进生长 生长激素释放因子(growth hormone releasing factor) 促进生长 胰岛素(insulin) 治疗糖尿病(diabetes) 干扰素(interferon) 抗病毒抗肿瘤 白细胞介素(interleukin) 治疗癌症 ;基因重组乙肝疫苗 用基因重组技术把乙型肝炎病毒的表面抗原 （HbsAg）基因片段插入酵母细胞或哺乳动物细胞的基因中，在体外培养增殖过程中组装或分泌出乙型肝炎表面抗原，然后把表面抗原收集起来提纯之后做成乙型肝炎疫苗。 ;乙肝疫苗的制备;目的???因的获取;cDNA文库的建立;工程菌的构建;材料 菌株﹑质粒及细胞 大肠杆菌 DH5α 和质粒 pMD18-Sm（携带改变稀 有密码子后的 S 基因） 质粒 pCIneo CHO ／ dhfr-细胞 pMD18-T 载体 ;主要试剂 限制性内切酶、T4 DNA ligase、质粒 DNA 提取? 和柱式胶回收试剂盒 乙型肝炎表面抗原检测试剂盒 DMEM 和透析胎牛血清 胰蛋白酶、氨甲喋呤（MTX）和脂质体 Lipofectamine TM HBsAg 血凝检测试剂盒; 目的基因的表达; 蛋白质的分离纯化;浓缩与初步纯化 离子交换层析 疏水层析 亲和层析 固液分离 离心沉淀 膜过滤 双水相萃取 高度纯化 DNA的去除 热原质的去除 病毒的去除 ;分离纯化的基本要求 技术条件温和，保持其生物活性 选择性好，达到有效分离纯化的目的 技术间可以直接连接，节省工艺步骤 收率高，过程快 选择分离纯化方法的依据 根据产物表达形式来选择 根据分离单元之间的衔接来选择 根据分离纯化工艺的要求来选择 ;分离纯