不同采精法对犬精液品质的影响.docVIP

PAGE PAGE 1 不同采精法对犬精液品质的影响 　　摘要：本试验采用手握采精法、电刺激采精法及附睾采精法采集精液，进而进行精液品质分析，本试验以繁殖机能正常、健康无病的1只2岁雄性土犬及延边某屠宰场提供的50只2～7岁之间肉用公犬为实验材料，探讨不同采精法对犬精液品质的影响，为犬人工授精和体外受精技术提供试验依据。结果如下：附睾采精法采集犬精子活率为39.70%，显著低于手握法62.90%和电刺激采精法60.33%（P 　　关键词：犬；精液品质 　　中图分类号：S829.2文献标识码：A文章编号：1674-0432（2012）-11-0064-2 　　犬，又名狗，属于脊椎动物门，哺乳纲，食肉目，犬科，具有嗅觉发达、喜近人、易于驯养等特点[1]。随着我国国民经济的迅猛发展，在军犬、警犬得到广泛应用的同时，肉用犬的饲养也已形成规模，同时宠物犬进入寻常百姓家，养犬热升温，种犬昂贵，配种价格极高。而开展种犬的精液采集与品质分析方面的研究，进而进行人工授精，不但能提高种犬的利用率，还可消除自然交配不可避免的弊端，同时带来可观的经济效益。 　　犬的精液采集是犬人工授精的重要步骤，也是人工授精成败的关键[2]。如果精液采集方法不当，将导致采集不到精液或精液品质下降，严重的还会损伤公犬的生殖器，导致公犬性欲减退，出现尿道结石等病症，甚至丧失配种能力。目前，常用的犬精液采集方法有4　种，即假阴道法、手握法、电刺激法和电振动仪法。附睾采精法不常用，但在保护濒危动物方面具有很大的价值。本试验应用手握法、电刺激采精法及附睾采精法三种方法，进行精液品质分析，比较3种不同采精方法的优劣。通过对采精方法每一个环节的改进，从而更好的掌握和创新了手握采精法，得到了良好的效果。 　　1　材料 　　1.1　实验动物 　　繁殖机能正常、健康无病的2岁雄性土犬1只；延边某屠宰场提供的50只2～7岁之间肉用公犬。 　　1.2　主要仪器 　　OLYMPUS光学显微镜，电子天平，数码相机，移液器，电刺激采精器，DDL-5型低温离心机，HH-S恒温水浴锅，高压灭菌锅，KWB-50A型加热板；精液低温处理装置等。 　　1.3　主要试剂 　　乳糖，果糖，青链霉素，柠檬酸和甘油，鸡蛋、蒸馏水，姬姆萨色液等。 　　1.4　染色液的配制 　　姬姆萨染色原液的配制：称取姬姆萨染料1g，甘油66mL，甲醇66mL，将研磨好的姬姆萨染料加入少量60℃的甘油中，研磨至完全无颗粒的匀浆，再将剩余甘油倒入56℃恒温箱中2h，分别用甲醇清洗后放入棕色瓶中保存，二周后再使用，原液放置的时间越久越好，使用前先过滤。姬姆萨染色液的配制：根据每个抹片2mL来确定所需的染液量，配制好的染色液要立即使用，放置时间过久会使染色效果减退；配置比例为原液、缓冲液、蒸馏水分别为2：3：5。 　　2　方法 　　2.1　采精 　　2.1.1　附睾采精法　摘取成年公犬睾丸后30min之内，在实验室以外的条件下，用灭菌剪刀将睾丸连包皮切下并将切口扎紧，放入保温瓶中，立即送到实验室，在室温下置于无菌操作盘中，用灭菌剪刀将包皮和睾丸鞘膜剖开剪取附睾尾部放置于无菌培养皿内，用含有抗生素的生理盐水冲洗2～3次，然后将每侧附睾放入盛有2ml精子回收液的无菌培养皿中，采用切割的方法回收附睾尾部精子，最终将两侧附睾尾部的精子集中在一个试管中混匀，用于精液的处理。 　　2.1.2　手握法　采精者右手戴乳胶手套，左手拿集精管站在犬的左后方，右手握住阴茎球前后反复按摩，待阴茎勃起，弓腰射精时，左手马上用集精管盛接，右手继续进行按摩，犬首先射出透明的第一部分精液，马上取下第一只集精管，另一助手用吸管将精液取出检查，并迅速换上第二个集精管，右手继续进行加压按摩，待乳白色的第二部分精液射出之后，换下采集有精液的集精管，换上新的集精管，采集透明的第三部分精液。 　　2.1.3　电刺激法　将供采精公犬禁食12h，称量体重后，肌肉注射氯胺酮或鹿眠灵麻醉，犬倒地后，将其保定在手术台上，便于接取精液。犬麻醉保定后，将包皮先用温水冲洗，再用灭菌后的生理盐水冲洗。将包皮冲洗干净后，用37℃的蒸馏水进行灌肠，排净直肠内的宿便，使导电效果更好。采精时，采集者一手握住阴茎，另一手持集精杯，套住龟头进行分段采精。另一助手用液体石蜡将采精器电极棒浸润，缓慢插入直肠，达到靠近输精管壶腹部直肠底壁（约10～15cm），接近耻骨为宜，调整刺激部位。另一手控制好采精器，输出电压先弱后强，强度先小后大，根据犬的反应及后肢收缩程度，逐渐调整档位，刺激持续10～15s后，要间断3～5s。在采精的整个过程中，要使电极棒向直肠腹侧壁紧压，并不断前后轻微滑动，调整最佳刺激部位。如果第1次没有采集到精液或采的量少，隔5min后再次进行采精。 　　2.2　精液品质检验 　　2.2.1