沉淀反应专业医学知识宣讲课件.ppt

沉淀反应专业医学知识宣讲;;形成肉眼可见的大的免疫复合物。沉淀线或沉淀环的观察以及免疫比浊法中的终点法就是测定此阶段形成的复合物　　;免疫浊度测定 絮状沉淀试验; ;方法受抗原抗体比例的影响非常明显 应用于测定抗原抗体反应的最适比例 (三种类型);抗原稀释法：抗原最适比例;1. 抗原稀释法;1:2;;表6-1 最适比方阵测定法;;二、免疫浊度测定(immunoturbidimetry);;1.抗原抗体的比例：反应体系中保持抗体过量 2.抗体的质量 ：特异性强，效价高，亲和力　　　　　　　强并使用R型抗体 3.抗原抗体反应液的最适PH为6.5～8.5 4.使用增浊剂;1.透射免疫比浊法 2.散射免疫比浊法 3.免疫胶乳比浊法 ;第三节　凝胶内沉淀试验（gel phase precipitation）; 可溶性抗原和相应抗体在凝胶中扩散，形成浓度梯度，在抗原抗体相遇并且浓度比例适当的位置形成肉眼可见的沉淀线或沉淀环。 常用的凝胶有琼脂、琼脂糖、葡聚糖或聚丙烯酰胺凝胶。;Ab;原理：抗体与待测的抗原,在两者比例合适的部位结合形成沉淀环。 环的大小与抗原的浓度成正相关。;抗体+琼脂;沉淀环的直径与待测标本含量两种计算方法;　　 t1为16～24h；t2为24～48h；t3为48h以上,可见t1为直线，t3为反抛物线;标准品抗原浓度测定;1.测定沉淀环直径 2.在标准曲线上查找 相应抗原浓度;;;影响因素;;; 原理示意图;;1.检测未知抗原或抗体 2.抗原性质分析 3.抗体效价滴定 4.抗原或抗体纯度鉴定;Ag; 2.抗原性质分析;; 1.周围6个孔放不同稀释度的相应Ab。; “1” 为单一抗原抗体系统。;小结;重点;选择题;;;;;第四节　免疫电泳技术（immunoelectrophoresis technique）; ;V:泳动速度cm/秒or分 d:泳动距离cm t:电泳时间 (秒/分) E:电场强度 伏特/cm;;外因： 1.电场强度V ( U/L)电场强度越大，带电质点泳动速度越快。 2.缓冲液的pH (pH恒定)：溶液的pH值决定了带电质点的解离程度，也决定了物质所带电荷的多少。 3.离子强度[I]溶液的离子强度越高，颗粒泳动速度越慢，反之越快。 最适:0.02-0.07 4.电渗：液体对固体支持物的相对移动. 由于琼脂中含有SO42-，带负电荷，造成静电感应致使附近的水带正电??，而向负极移动 ;NH 3 + 　　　　　 NH 3 + 　　　　　NH 2 |　　　　　 +OH - | 　　　 +OH -　 | Pr-COOH ====== Pr-COO - ====== Pr-COO -  +H +　　　　　　　 +H + 阳离子　　　　 两性离子　　　　　阴离子 pHpI 　　　　　　pH=pI　　　　　 pHpI 蛋白质的等电点 (pI) ： 　　　在一定的介质中，某一蛋白质解离成阴、阳离子的趋势相等，成为两性离子 (净电荷为零),此时介质的pH称为蛋白质的等电点。;;;醋酸纤维素薄膜电泳分离血清清蛋白;架膜;优点： 1.加快反应的速度。 2.提高了灵敏度。 　　3.增加了分辨率。 　　　;;原理：双向扩散 + 电泳 比双向扩散试验灵敏度提高8－16倍;通电;;结果分析： 无沉淀线出现则表明无相应的抗原。 沉淀线位于抗原抗体孔中间，说明两者比例较适合。 沉淀线偏向抗原孔一方，表示抗体浓度＞抗原，反之，则是抗体浓度＜抗原浓度。;电泳时凝胶中抗体不移动，样品孔中的抗原向正极泳动，随着抗原量的逐渐减少，抗原泳动的基底区越来越窄，抗原抗体分子复合物形成的沉淀线逐渐变窄，形成一个形状如火箭的不溶性复合物沉淀峰，抗体浓度固定时，峰的高度与抗原量呈正相关。 ;;1.2%巴比妥琼脂糖约55℃，加入适量抗血清，混匀后制板，打孔，孔内加待测样品，样品孔放负极侧， 6h后观察琼脂板上沉淀峰，绘制标准曲线，求出待测样品浓度。;1.琼脂（无电渗或电渗很小的）影响火箭形状不规则。 2.电泳终点时间的确定。3.标本数量多时应先通电后加样,防止宽底峰形. 4.IgG定量时，可用甲醛与IgG上的氨基结合（甲酰化），抵消了电渗作用。 ;;原理：区带电泳＋双向扩散 1、将蛋白质抗原在凝胶中电泳分成肉眼不可见的若干区带 2、沿电泳方向挖一与之平行的抗体槽，加入相应抗血清进行双向扩散 。 ;免疫电泳;纯化抗原和抗体成分的分析及正常和 异常免疫球蛋白的识别与鉴定; ;免疫电泳原理，不同之处是将抗血清直接加于电泳后的蛋白质区带表面，抗