外植体和消毒课件.ppt

消毒剂的选择 在选择一种消毒剂时，首先要了解消毒剂的性质，但同时又应认识到没有一种消毒剂是完全理想的。细菌学家建议理想的消毒剂应该具备以下九大特征。 如何选择消毒剂？ 一个原则：既要除去材料上 的微生物，又不能伤及材料 消毒剂九大特征 ①能广谱地杀灭微生物； ②对人体无毒； ③无腐蚀性，对设备无污染； ④具有洗涤剂作用； ⑤具有稳定性； ⑥作用迅速； ⑦不因有机物的存在而失去活性； ⑧产生所期望的后效作用； ⑨廉价。 各种试剂都有优点和局限性，应选择一种试剂或几种试剂结合使用，以最低成本获得最大效果。 75％酒精(Alcohol)溶液(体积分数) 酒精渗入细菌体内使细菌蛋白质凝固，而被杀死。 75%效果最好，使用最多，因为75%能凝固蛋白质，但不会行成包膜，能杀死。 高浓度酒精与细菌接触后，使其表面凝固行成包膜，阻碍了酒精凝固其内部蛋白，不能彻底杀死； 当酒精浓度低了也起不到相应的效果。 常见消毒剂的配制、作用原理及使用 75％酒精溶液配制及贮存 以配制一L 75%酒精为例。 1(L)*75%=95%*X，那么X=0.75/0.95=0.78947(L),即需要加入789.5(mL)95%的灯用酒精，同时加入210.5(mL)的三级水（配制培养基所用水）混合均匀即成。 为何选用95%酒精？ 贮存：密闭保存备用。原因何在？ 常见消毒剂的配制、作用原理及使用 75％酒精溶液的使用 乙醇具有较强的穿透力和杀菌力，在外植体消毒时常作为表面消毒的第一步，时间常为30-45秒，具有浸润和灭菌双重作用，需要结合其他药剂灭菌才能达到彻底灭菌的作用。 常见消毒剂的配制、作用原理及使用 0.1%升汞溶液 升汞是有剧毒的重金属盐杀菌剂，原理在于Hg2+可与带负电荷的蛋白质结合，使菌体蛋白质变性失活。可有效杀死外植体表面的细菌和真菌芽孢，但需要无菌水冲洗5次以上，以清洗残留的汞。 注：1、灭菌后溶液，可倒回原液再次使用； 2、灭菌时间需要严格控制（原因）。 常见消毒剂的配制、作用原理及使用 0.1%升汞溶液的配制和贮存 以配制500mL 0.1%升汞溶液为例 准确称取0.5g升汞,加入预热至90度的500mL三级水中，混匀溶解。 封闭贮存，置于角落并在瓶壁上标注危险品标志。 常见消毒剂的配制、作用原理及使用 其它灭菌剂 可根据具体实验的需要，查明其作用原理，配制、贮存、使用方法。 前处理 获取外植体 酒精灭菌 氯化汞灭菌 无菌水冲洗 接种 外植体灭菌流程图 第三节、外植体的接种——无菌操作 接种时由于有一个敞口的过程，是极易引起污染的时期，这一时期主要由空气中的细菌和工作人员本身引起，接种室要严格进行空间消毒。接种室内保持定期用1%～3%的高锰酸钾溶液对设备、墙壁、地板等进行擦洗。除了使用前用紫外线或臭氧灭菌外，还可在使用期间用75%的酒精或3%的来苏儿喷雾，使空气中灰尘颗粒沉降下来。 无菌操作技术分解 （1）在接种前20min，打开超净工作台的风机以及台上的紫外灯； （2）超净工作台及紫外灯工作20分钟后，关掉紫外灯，15分钟后可进行操作; （3）实验人员先洗净双手，在缓冲间换好专用实验服，并换穿拖鞋等； 实验人员衣物带有很多灰尘，在室内走动时，相当于制造“菌雾”，因此，进入接种室必须换上专用工作服，头发上的灰尘也很多，因此，应戴上工作帽。 （4）上工作台后，用酒精棉球擦拭双手，特别是指甲处。然后擦拭工作台面； 进入接种室前，操作人员的双手必须进行消毒，首先用肥皂水或洗手液洗净双手，及时剪除较长的指甲。 （5）先用酒精棉球擦拭接种工具，再将镊子和剪子从头至尾过火一遍，然后反复过火尖端处，对培养皿要过火烤干； 无菌操作技术分解 （6）接种时，实验人员双手不能离开工作台，不能对着操作区说话、咳嗽和走动等； 戴上口罩、帽子，防止由呼吸、说话或咳嗽引起的污染；走动会带来“菌雾” 7）接种完毕后要清理干净工作台，可用紫外灯灭菌30min，养成良好的操作习惯。 注：若连续外植体接种，每5天要大强度灭菌一次。 无菌操作技术分解 Detail is the Key of Success 养成“双手不从开盖瓶口等开放处划过”、“超净工作台内动作轻、缓”等良好习惯。 在无菌操作时，最应该引起警惕的是“双重传递污染”，即接种器械被手或其它物品污染后双浸染培养基或试管苗等。 接种工具每用一次即需要彻底高温灭菌一次， 准备多套接种器械，轮换使用。 操作时打开三角瓶或试管，最大污染机会是管口形成负压，空气进入而带来灰尘，因此要求用火焰烧瓶口，杀死菌类。用薄膜做瓶盖时，应该在火焰附近打开盖子；若不用酒精灯接种时，三角瓶或试管应拿成斜角，既已减少灰尘和偶尔存在的细菌落入也