第十二章层析技术.pptVIP

第十二章 层析技术 主要内容 第一节 概述 第二节 吸附层析技术 第三节 凝胶层析技术 第四节 离子交换层析技术 第五节 亲和层析技术 硅胶—— 作吸附层析剂，还可作为其他层析剂的基质 在碱性水溶液中不稳定，应用的常规pH为2-8 活性硅胶为多孔的，吸附作用与本身含水量有关 硅胶的活化、再生 可分离氨基酸衍生物、甾体激素、皂苷类、类脂及色素等 氧化铝 常用的亲水性吸附剂，较高吸附容量，分离效果好，尤其适用于亲脂性成分的分离 吸附活性与含水量相关 羟基磷灰石 吸附容量高，稳定性好，可制备及纯化蛋白质、酶、核酸、病毒等 （二）有机吸附剂：活性炭 一、亲和层析的分离原理 END! 四、凝胶柱层析的操作 层析剂选择和预处理 装柱 平衡 上样 洗脱 检测 收集 层析剂再生和保存 根据样品确定分离范围，从而选择合适型号的凝胶——应将大分子完全排阻而小分子完全渗透。 适当的颗粒度： 颗粒小，分辨率高，但相对流速慢，有时会造成扩散现象严重； 颗粒大，流速快，分辨率较低但条件得当也可以得到满意的结果。 1、凝胶选择 2、凝胶的处理 估算用量：首先要根据选择的层析柱估算出凝胶的用量。 溶胀：在10倍以上的水中（或洗脱剂）充分溶胀倾泻法去悬浮物小颗粒减压排气 3、层析柱的选择 层析柱的直径和长度比一般在1:25－1:100之间。 将柱子洗涤干净 安装柱并调垂直 关闭层析柱出