AtMYB2转录因子的原核表达及与SCMO基因启永动子相互作用分析.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 辽宁师范大学硕士学位论文摘 辽宁师范大学硕士学位论文 摘 要 AtMYB2转录因子属于MYB家族蛋白，它的表达受ABA、脱水和盐诱导，它能与 TGGTTAG(反向互补序列为C吖姨CCA)序列结合，促进下游基因的表达。胆碱单加 氧酶(CMO)是植物体内催化胆碱合成甜菜碱第一步反应过程中的关键酶，它的表达是 受盐诱导的。辽宁碱蓬CMO基因启动子．267～+1bp区段(命名为pC5)是盐诱导启动 子，其序列上含有AtMYB2转录因子的识别位点TAACCA。在AtMYB2／CMO-pC5双 价转基因烟草体内，AtMYB2转录因子能使转基因烟草中GUS活性增加，AtMYB2转 录因子在体内能与CMO启动子相互作用。本实验用原核表达的方法，纯化得到AtMYB2 融合蛋白，通过EMSA实验，验证在体外AtMYB2转录因子能否与CMO基因启动子 直接结合，从而分析AtMYB2转录因子对CMO基因表达的调控作用。主要内容与结果 如下： 1、构建了原核表达载体pET30a-AtMYB2，并将其转化到E．BL21(DE3)菌株中， 获得工程菌E．BL2 1-pET30a-AtMYB2。 2、AtMYB2融合蛋白可在大肠杆菌中高效表达，融合蛋白既以可溶蛋白形式存在， 也以包涵体形式存在。通过从IPTG浓度、诱导温度、诱导时间三方面因素优化了 AtMYB2融合蛋白可溶表达的最佳条件，确定了以0．1mM IPTG诱导，30℃培养10h， 可溶蛋白表达量最高。 3、利用Ni2+亲和纯化了AtMYB2可溶蛋白和6xHis载体蛋白。 4、通过凝胶阻滞分析实验验证AtMYB2蛋白与CMO基因启动子之间的相互作用， 结果表明，AtMYB2转录因子能与SICMO启动子中TAACCA序列直接结合。进一步证 明AtMYB2可能是调控彻基因表达的一个转录因子 关键词：AtMYB2转录因子；CMO基因启动子；原核表达；凝胶阻滞分析 AtMYB2转录因子的原核表达及与 AtMYB2转录因子的原核表达及与SICMO基因启动子相互作用分析 Prokaryot i C Express i on of AtMYB2 Transcr i pt i on Factor and l nteract i on Ana I ys i S W i th S／CM0 Promoter Abstract AtMYB2 transcription factor iS a homolog of m family，it Was induced by dehydration．high-salt condidon and exogenous ABA．A心“B2 transcription factor Call bind to the sequence of TGG丌AG(which is reverse and complementary to CT从CCA)and enhance of downstream genes expression． Choline Monooxygenase(CMO) is a ferredoxin-dependent s仃oma enzyme which catalyzes the first step of glycine betaine synthesis in plants．，111e transcription and expression of伽gene are induced by salimty in plants．$ICMO promoter was isolated from Suaeda liaotungensis and found the region-267～ +lbp(named pC5)is a salt-induced promoter．pC5 promoter contains AtMyB2 transcription factor recognition sequence TAACCA(which iS reverse and complementary to TGGTTA)． A1MYB2 transcription factor Can interact with田CM0 promoter in pC5。C耵S／AtMYB2 transgenic tobacco plants and activate the transcription of GUS reporter gene．、№expressed A心压YB2 fusion protein in Escherichia coli cells and get purified ATMYB2 fusion protein． We analysi