AAPH诱导小鼠早期胚胎氧化应激的分子机制及谷胱甘肽抗氧化作用一的研究-动物学专业毕业论文.docxVIP

型壅堡垒竺坚望量!：垦呈塑墼堕塑丝窒堂塑坌三垫型垦查些蔓鉴垫墨垡堡旦塑!墅 一 体膜电位显著降低(P0．05)，凋亡相关基因(Bax、Caspase3、Caspase8、 Caspase9)的表达均显著升高(P0．05)，并检测到早期凋亡信号。合子基因组 激活相关基因(Zscan4d、elF-1A、Hspalb、H2afz／)的表达量均极显著降低 (P0．01)。 二、GSH对AAPH处理后的早期胚胎发育的恢复及其作用机制 1、在1．5mMAAPH处理条件下，同时分别加入1、2、3mM的GSH分别 处理受精卵和2．细胞胚胎。处理受精卵24h后，各浓度的GSH均不能使2一细胞 胚胎突破阻滞，但能够显著提高第一次卵裂率。其中，2mM GSH处理后第一次 卵裂率最高。处理2．细胞24h后，胚胎有部分能够突破2一细胞阻滞但均不能发 育到囊胚阶段。因此，本实验选择处理条件为2mM GSH+I．5mM AAPH、处理 时间24h的受精卵作为研究对象。DCFH．DA染色及活性氧相关基因检测结果显 示，与对照相比，活性氧水平仍显著升高(PO．05)。 2、加入GSH后，线粒体膜电位显著升高(P0．05)，并且未检测到早期 凋亡信号以及合子基因组激活相关基因表达的恢复。 3、低浓度AAPH(0．5mM)处理受精卵后，只有8％的受精卵能发育到4． 细胞，加入GSH后有23．7％能够发育到4．细胞，显著降低了胚胎的阻滞率(P O．05)，提高了胚胎的发育率，但胚胎仍不能发育到囊胚阶段。 综上所述，较高浓度的AAPH会引起活性氧水平的升高，从而产生氧化应 激，进而引起线粒体膜电位的降低，诱发细胞凋亡，使小鼠胚胎发育阻滞在2一 细胞阶段，抑制了合子基因组的激活。而GSH在高水平的活性氧条件下不能使 胚胎突破发育阻滞，但在低水平活性氧条件下可以降低胚胎的阻滞率，提高胚 胎的发育率。本研究初步分析了活性氧影响早期胚胎发育过程的分子机理，为 万方数据 内蒙古大学 内蒙古大学 硕士学位论文 下一步深入研究活性氧的相关机制奠定了工作基础，同时为哺乳动物体外受精 培养体系的优化提供了理论依据。 关键词：活性氧；AAPH；GSH；凋亡；合子基因组激活 万方数据 刘雅贤AAPH诱导小鼠早期胚胎氧化应激的分子机制及谷胱甘肽抗氧化作用的研究 刘雅贤AAPH诱导小鼠早期胚胎氧化应激的分子机制及谷胱甘肽抗氧化作用的研究 THE MOLECULAR M匝CHANISMS OF OXIDATIVE STRESS INMOUSE E A R I Y EMBRYO INDUCED BY AAPH AND THE ANTIOXIDANT EFFECTS OF GLUTATHIONE AB STRACT With the continuous improvement of technology,in recent years，in vitro fertilization(IVF)technology is widely used in large—scale production of fine properties of livestock embryo，human infertility treatment，and SO on．Despite researchers have made a great effort to optimize the medium and culture conditions， the culture condition Can’t completely simulate the fertilization conditions in vivo，SO the embryo development rate in culture systerm is difficult to achieve that in vivo．It is well showed that the effect of ROS on embryo development，however，the molecular mechanism is unclear．This study was focused on the molecular mechanisms of oxidative stress induced by oxidizer,AAPH and the recovery role of the antioxidant activity of glutathione GSH in mouse early embryos． 1．The study about the effect ofAAPH on early embryo development of mous