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分 子 荧 光 光 度 法 第一节 概 述 一、光致发光 物质分子吸收特定波长的光能后，由基态跃迁至激发态。处于激发态的物质分子是不稳定的，可能通过辐射（发光）或非辐射的形式放出多余的能量，由激发态重新回到基态。物质分子吸收外来光被激发后所产生的发光现象，叫光致发光。 荧光 10-9~10-6s 实用 磷光 10-3~10s 不实用 二、荧光光度法 利用测量荧光强度而建立起来的一类测定物质含量的分析方法，称为荧光光度法，即荧光法。 优点：灵敏度高，10-7~10-9g/ml，比紫外分光光度法灵敏度高10~1000倍。 第二节 基本原理 一、荧光的产生 基态 激发光 激发态 去激发 基态 （一）激发 处于基态的物质分子吸收光能时，其电子对中的一个电子被激发到某一较高能级。 基态单重态 所有电子都自旋配对的分子电子态。 激发态 激发单重态 S1 S2 …… 激发三重态 T1 T2 …… (二)去激发 指分子中处于激发态的电子以辐射或非辐射方式回到基态的过程。 辐射跃迁 荧光 去激发 磷光 振动驰豫 无辐射跃迁 内转移 （热的形式） 体系间跨越 外转移 1、振动驰豫 同一电子能级中，电子由高振动能级跃迁到低振动能级，并将能量以热的形式传递给溶剂分子，这一过程称振动驰豫。 2、内转移 两个相邻电子能级相距较近，以致其振能级重叠时，电子由高电子能级跃迁至低电子能级，同时将能量以热的形式传递给溶剂分子。 意义：无论分子中的电子最初被激发至哪一激发单重态（如S1、S2、S3……)，它都能通过内转移和振动驰豫到达S1的最低振动能级上。 一般情况下，S1与S0之间很难发生内转移；T1与S0之间发生内转移的几率要大些。 3、体系间跨越 电子由激发单重态向激发三重态的无辐射跃迁称为体系间跨越。常见于含重原子(I、Br)的有机分子中。 4、外转移 激发态分子与溶剂分子或其它溶质相互作用，以热的形式失去多余的能量回到基态，这一过程叫分子的外转移。外转移后，分子的荧光或磷光减弱或消失，称“猝灭”或“熄灭”。磷光寿命长，发生外转移机率大，所以室温下很难见到磷光。 5、荧光发射 电子由第一激发单重态S1（最低振动能级）跃迁至基态S0而发射的光叫荧光。 6、磷光发射 电子由第一激发三重态T1跃迁至基态S0而发射的光叫磷光。 跃迁方式 时间 振动驰豫 10-12 ~ 10-14 S 内转移 10-11 ~ 10-13 S 荧光 10-6 ~ 10-9 S 磷光 10-4 ~ 10 S 二、影响荧光的因素 荧光效率： ψf = 发射荧光的分子数 被激发的分子总数 荧光效率越大，表示分子产生荧光的能力越强。 1、分子结构 (1)π→π*跃迁能产生较强荧光。——产生荧光的主要跃迁类型 (2)含π-π共轭体系的有机分子，电子共轭程度越大，荧光效率越大。 (3)刚性结构和共平面效应：随分子的刚性和共平面性增加，电子共轭程度亦增加，荧光效率增大。 (4)取代基效应：斥电子基→ψf↑ 吸电子基 →ψf↓