ⅠVEGF受体KDR FLT1结合小肽对血蒸管形成和肿瘤生长的抑制;Ⅱ栝楼冠瘿组织 毛状根的培养及天花粉蛋白的产生.docx

●甄丽研面■——————一——～第一部分、 ●甄丽研面■——————一——～ 第一部分、 VEGF受体KDR、FU、．1结合小肽对血管形成和肿瘤生长的抑制， ／ 中 文 摘 要 f ＼新乍m管形成是自．径超过0．5一l mm文体瘤乍长和转移所必需。J缸锚呐坡细 胞1-K闪了(VEGF)足一个血管内皮细胞的促分裂原和新7L-【Ik管形成脚了， 它结合酪氦酸激酶受体KDR／FLKl和FLT-l能促进新q血管形成。筛选封闭 VEGF 1j其受体KDR2FLT．I相互作用的小肽可以通过阻断新生血管形成而抑制 实体癌’E长和转移。 既往以具有生物学活性的VEGF可溶性受体FLT—l、KDR为靶分子，通过 生物淘筛(Bio-panning))懒体展示12肽库中筛选获得了一个能董KDR结合 的阳性克隆K237和两个能与FLT．1结合的阳性克隆F56、F90√本实验根据小 肽K237、F56、F90的氨基酸序列合成了相应的核苷酸片段，然后将其克隆剑 二氢叶酸还原酶09m-R)原核表达载体pQE42中，在大肠杆菌M15中稳定表 达二氢叶酸还原酶融合蛋白DHFR-K237／F56／F90：经变性、复性同步纯化后得 到纯度达90％的可溶性蛋白。 (酶联免疫吸附法显示，DHFR-F56／F90能!j可溶性受体FLT．1结合、 DHFR．K237能与可溶性受体KDR结合；免疫细胞化学实验表明，DHFR- F56／F90／K237能与人脐静脉内皮细胞结合。竞争抑制实验显示，DHFR-F56和 合成小肽F56能竞争抑制VEGF结合Fu’．1，DHFR-K237和合成小肽K237能 竞争抑制VEGF结合KDR：315IdR掺入实验表明DHFR-K237和合成小肽K237 能显著抑制由VEGF刺激而引起的人脐静脉内皮细胞增殖。鸡胚尿囊膜血管增 生抑制实验表明，DHFR．F56／K237及合成小肽F56、K237能显著抑制鸡胚绒 毛尿囊膜新生血管形成。BALB／c裸鼠成瘤实验显示小肽融合蛋白DH]ZR-F56 ≮DHFR．K237能显著抑制荷瘤裸鼠中肿瘤的生长和促进肿瘤组织坏死，且免 疫组织化学实验提示Dt-tFR．F56能定位于肿瘤部位与人胃癌MGC803细胞结 合。SCD小鼠成瘤实验显示合成小肽F56、K237能显著抑制荷瘤裸鼠中肿瘤 两 两 一 VEGF受体KDR、FLT．1结合小肽对血管形成和肿瘤生长的抑制， ／ 中 文 摘 要 f ＼新乍m管形成是氲径超过0．5一l mm吱体瘤乍长年{啭移所必需。j缸管内J史细 胞慢KI为了．(VEGF)是一个血管内皮细胞的促分裂原和新7E缸管形成斟予， 它结合酪氨酸激酶受体KDR／FLKl和FLl二l能促进新qm管形成。筛选封闭 VEGF 1j其受体KDPdFLT．1相互作用的d蜮可以通过阻断新生血管形成m抑制 实体瘤，E长和转移。 既往以具有生物学沂陛的VEGF可溶性受体FLT—l、KDR为靶分子，通过 生物淘筛(Bio-panning)从噬菌体展示12肽库中筛选获得了一个能皇KDR结合 的阳性克隆K237和两个能与FLT．1结合的阳性克隆F56、F90。)本实验根据小 肽K237、F56、F90的氨基酸序列合成了相应的核苷酸片段，然后将其克隆到 1二氢叶酸还原酶(D哳R)原核表达载体pQE42中，在大肠杆菌M15中稳定表 达二氢叶酸还原酶融合蛋白DHFR-K237／F56／F90：经变性、复性同步纯化后得 到纯度达90％的可溶性蛋白。 f酶联免疫吸附法显示，DHFR-F56／F90能!j可溶性受体FLT-l结合、 DHFR—K237能与可溶性受体KDR结合；免疫细胞化学实验表明，DHFR- F56／F90／14．237能与人脐静脉内皮细胞结合。竞争抑制实验显示，DHFR-F56和 合成d,tli F56能竞争抑制VEGF结合FLnl，DHFR-K237和合成小肽K237能 竞争抑制VEGF结合KDR：3HTdR掺入实验表明DHFR-K237和合成小肽K237 能显著抑制由VEGF刺激而引起的人脐静脉内皮细胞增殖。鸡胚尿囊膜血管增 生抑制实验表明，DHYR．F56／K237及合成小肽F56、K237能显著抑制鸡胚绒 毛尿囊膜新生血管形成。BALB／c裸鼠成瘤实验显示小肽融合蛋白DI-IFR-F56 ≮DHFR．K237能显著抑制荷瘤裸鼠中肿瘤的生长和促进肿瘤组织坏死，且免 疫组织化学实验提示Dt-IFR．F56能定位于肿瘤部位与人胃癌MGC803纽胞结 合。SCID小鼠成瘤实验显示合成小肽F56、K237能显著抑制荷瘤裸鼠中肿瘤 中国}舟椰医科大学 中国}舟椰医科大学 中国医学科学院 博士论文 的生长、转移和促进肿瘤组织坏死J结果提示，12肽F56足VEGF结合FLT．1、 12肽K23