第四章-中药制剂的含量测定上课讲义.ppt

操作过程 a.先配制已知浓度的标准样品，加一定量的内标 标准液 标准色谱图 b.未知浓度的样品加同量内标 待测溶液 样品色谱图 (Ci%)样品 (Aifi′/Asfs ′)样 (Ai/As)样 ＝ ＝ (Ci%)标准 (Aifi′/Asfs ′)标 (Ai/As)标 (Ai/As)样 (Ci%)样品＝ × (Ci%)标准 (Ai/As)标 优点： a.定量准确 b.操作条件影响不大 c.没有归一化的缺点 缺点： 每次测定都要精确配制含内标的样品，另内标的选择也较难。 3、外标法 即以待测组分的标准品作对照物,与对照物对比求算待测组分含量的方法. 优点：操作简便、计算方便 缺点：需严格控制进样体积，操作条件应稳定 单点校正 前提：曲线过原点 配一与被测组分含量接近的标样Ps％，进样量同分析样品。 Ai Pi％＝ · Ps％=Ki ·Ai As Ki：标样单位峰面积所代表的百分含量 不过原点，双点校正。 荧光分析法 特点：灵敏度高，选择性好。（荧光法灵敏度可达10?10g/ml~10?12g/ml，而一般紫外?可见分光光度法的灵敏度约为10?7g/ml。） 适用：成分本身具有荧光或经衍生化能转变 为荧光化合物 稀溶液中测定 产生荧光必须具备两个条件： 第一是物质分子必须有强的紫外?可见吸收；第二是必须具备较高的荧光效率。 原理： 若浓度C很小，当ECL≤0.05时，则： F= 2.3K’фf I0ECL = K C 在低浓度时，溶液的荧光强度与荧光物质的浓度呈线性关系，此系荧光法定量分析的依据。 定量分析方法： 1．标准曲线法 荧光分析一般采用标准曲线法（校正曲线法），在绘制标准曲线时，常采用标准溶液系列中某一溶液作为基准，先将空白溶液的荧光强度调至0，再将该标准溶液的荧光强度调至100或50，然后测定系列中其它各个标准溶液的荧光强度F，再绘制标准曲线，即F-C曲线。 在实际工作中，当仪器调零之后，先测定空白溶液的荧光强度F0，然后测定各个标准溶液的荧光强度F，得（F－F0）就是标准溶液本身的荧光强度。通过这样测定，再绘制标准曲线，即（F－F0）-C曲线。 为了使不同时间绘制的标准曲线能前后一致，每次绘制标准曲线时均采用同一标准溶液进行校正。 如果试样溶液在紫外光照射下不很稳定，则须改用另一种性质稳定，而且所发生的荧光和试样溶液的荧光相近似的标准溶液作为基准。 如测定维生素B1时，采用硫酸奎宁的0.05mol/LH2SO4溶液作为基准(适用于蓝色荧光)； 若为黄绿色荧光可用荧光素钠的水溶液； 红色荧光可用罗丹明B水溶液为基准。 2．比例法 若标准曲线通过零点，可用比例法进行测定。 配制一标准溶液，使其浓度在线性范围内，测定荧光强度FS，然后在同样条件下测定试样溶液的荧光强度FX。由标准溶液的浓度CS和两种溶液的荧光强度比，求得试样中荧光物质的浓度CX或含量。在空白溶液的荧光强度不为零时，按下式计算。 3．解线性方程法 多组分混合物的荧光分析也可以象吸收分光光度法一样利用荧光强度的加和性质，采用解线性方程组的方法、双波长及多波长等方法从混合物中不经分离即可测得被测组分的含量。 第四节 含量测定方法的效能指标 常用的效能评价指标有： 准确度、精密度、选择性、检测限、定量限、线性与范围、耐用性等。 分析方法的效能指标可以作为对分析方法的评估尺度，也可作为建立新的分析方法的实验研究依据。 一.准确度 考察准确度常用加样回收率评价 中药制剂含量测定的回收率一般要求在95%～105%(n≥5)，RSD一般应在3%以内 复杂操作样品，可要求略低，90%～110% 生物样品，一般控制回收率在 85%～115%（样品药浓≥200μg/L） 80%～120%（样品药浓200μg/L） RSD争取达到5%以内，但不超过10%。 二、精密度 重复性：在相同条件下，由一个分析人员同一次测定所得结果的精密度 重现性：在不同实验室由不同分析人员测定结果的精密度 当分析方法将被法定标准采用时，应进行重现性试验 三、选择性 选择性是指在样品中有其