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【解析】选D。红细胞洗涤过程中,应做低速短时间离心,以避免白细胞、淋巴细胞等一同沉淀,影响血红蛋白的提纯;离心后血浆在上层,并呈现黄色;洗涤红细胞时应用生理盐水而不用蒸馏水,否则,将导致红细胞破裂影响实验结果。因此A、B、C均错误。 6.(多选)(2012·镇江模拟)下列DNA粗提取的实验操作中,经过离心或过滤后,取上清液或滤液的有( ) A.在新鲜鸡血中加入适量的柠檬酸钠,混合均匀后离心 B.在盛有血细胞的塑料烧杯中加蒸馏水,快速搅拌后过滤 C.在2 mol/L的氯化钠溶液中放入丝状物,轻轻搅拌后过滤 D.在溶有DNA的氯化钠溶液中缓缓加入蒸馏水,轻轻搅拌后过滤 【解析】选B、C。柠檬酸钠能够防止血液凝固,新鲜鸡血经过离心后,上清液中血细胞较少。在血细胞中加入蒸馏水,细胞吸水而涨破,DNA在滤液中。含有DNA的丝状物溶于2 mol/L的氯化钠溶液中,则DNA在滤液中。当氯化钠溶液浓度为0.14 mol/L时,DNA溶解度最低而析出,杂质在滤液中。 7.(2012·广州模拟)某生物兴趣小组在“蛋白质的提取和分离”实验中,准备从猪的血液中初步提取血红蛋白,设计的“血红蛋白提取、分离流程图”如下: 请回答下列有关问题: (1)样品处理中红细胞的洗涤要用________反复冲洗、离心。向红细胞悬液中加入一定量的低浓度pH=7.0的缓冲液并充分搅拌,可以破碎红细胞,破碎细胞的原理是______________。 (2)血红蛋白粗分离阶段,透析的目的是_____________,若要尽快达到理想的透析效果,可以_____________(写出一种方法)。 (3)电泳利用了待分离样品中各种分子的___________等的差异,而产生不同迁移速度,实现各种分子的分离。 (4)一同学通过血红蛋白醋酸纤维薄膜电泳,观察到正常人和镰刀型细胞贫血症患者的血红蛋白电泳结果如图所示。由图可知携带者有____种血红蛋白,从分子遗传学的角度作出的解释是____。 【解析】(1)洗涤红细胞所用的溶液是生理盐水,根据渗透作用原理,将红细胞置于低渗溶液中,红细胞会吸水涨破,释放出血红蛋白。(2)血红蛋白粗分离阶段,透析的目的是除去样品中的小分子杂质;可通过增加缓冲液的量或及时更换缓冲液等方法缩短透析时间,能尽快达到理想的透析效果。(3)由于各种分子带电性质以及分子大小、形状等的差异,在电泳过程中产生了不同的迁移速度,实现各种分子的分离。(4)根据图示可知,镰刀型细胞贫血症的携带者含有两种血红蛋白,原因是携带者具有(控制血红蛋白的)一对等位基因,分别控制合成两种不同的蛋白质。 答案:(1)生理盐水 渗透原理(当外界溶液浓度低于动物细胞内液浓度时,细胞吸水涨破) (2)除去小分子杂质 增加缓冲液的量或及时更换缓冲液 (3)带电性质以及分子大小、形状 (4)2 携带者具有(控制血红蛋白的)一对等位基因,可以控制合成两种不同的蛋白质 专题4 生物技术在其他方面的应用 一、DNA的粗提取与鉴定 1.提取原理 DNA与杂质的_______不同,DNA与杂质对酶、高温、洗涤剂的__ _____不同。 溶解度 耐 受性 2.提取DNA的具体步骤 (1)实验材料的选取:本实验用____细胞做实验材料。 (2)破碎细胞,释放DNA:利用血细胞________的原理,注意玻 璃棒的__向搅拌,过滤取滤液。 (3)溶解细胞核内的DNA:在高浓度的NaCl溶液中,核蛋白容易 集聚,游离出的DNA溶解。 (4)DNA的析出:加蒸馏水降低NaCl溶液浓度,使DNA_____。 (5)DNA的初步纯化:将DNA丝状物再溶解、过滤,向滤液中加入 体积分数为95%的______溶液进行提纯。 3.DNA的鉴定 DNA在_______的条件下,与_______呈___色。 鸡血 吸水涨破 单 析出 冷酒精 沸水浴 二苯胺 蓝 二、血红蛋白的提取和分离实验 1.常用的分离方法:________法、凝胶电泳法等 2.基本原理 (1)凝胶色谱法的原理:相对分子质量大的分子通过多孔凝胶颗 粒的间隙,路程__,流动___;相对分子质量小的分子穿过多孔 凝胶颗粒内部,路程___,流动___。 (2)凝胶电泳法的原理:不同蛋白质的带电性质、_____、形状 和____不同,在电场中受到的作用力大小、_____、阻力不同, 导致不同蛋白质在电场中的运动____和运动_____不同。 凝胶色谱 短 快 长 慢 电量 大小 方向 速度 方向 3.血红蛋白的提取和分离程序 (1)样品处理: 红细胞的洗涤→________的释放→分离血红蛋白溶液 (2)粗分离——____:除去样品中相对分子质量较__的杂质。 (3)纯化:一般采用________法对血红蛋白进行分离和纯化。 (4)纯度鉴
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