实验六酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别.ppt

实验六 酵母菌的形态和子囊孢子观察 及死活细胞的鉴别 一、目的要求 观察酵母菌的形态及出芽生殖方式。 学习并掌握酵母菌子囊孢子的观察方法。 学习区分酵母菌死活细胞的实验方法。 二、基本原理——酵母菌形态 二、基本原理——美蓝染色液 美蓝为无毒性染料，其氧化型为蓝色，而还原型为无色。用它对酵母菌染色时，由于活细胞的新陈代谢作用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，所以酵母的活细胞无色；对于死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态，还可以区分死、活细胞。 二、基本原理——美蓝染色液 美蓝（氧化型） 蓝色 二、基本原理——子囊孢子观察 子囊孢子是子囊菌类真菌有性生殖产生的有性孢子。在酵母菌中，能否形成子囊孢子及其形态是酵母菌分类鉴定的重要依据之一。酵母菌形成子囊孢子需要一定的条件，所以对不同种属的酵母要选择适合形成子囊孢子的培养基。麦氏 (McClary) 培养基 ( 葡萄糖－醋酸钠培养基 ) 有利于酿酒酵母子囊孢子的形成。 三、实验器材 1.菌种：酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。 2.培养基：麦芽汁琼脂斜面，麦氏琼脂斜面。 3.溶液或试剂：碱性美蓝染液，5%孔雀绿，0.5%番红水溶液，95%乙醇。 4.仪器或其他用具：显微镜，载玻片，盖玻片，酒精灯，接种环，双层瓶（内装香柏油和二甲苯），擦镜纸等。 四、操作步骤——美兰染色 四、操作步骤——子囊孢子观察 1.菌种活化：将酿酒酵母移种至新鲜的麦芽汁琼脂斜面上，25-28℃培养24h左右，然后再转种2-3次。（注：麦芽汁斜面培养基需用新配制、表面湿润的。） 2. 产孢培养：将经活化的菌种转接到麦氏琼脂斜面上，25-28℃培养约一周。 3. 制片：取经产孢培养的酵母斜面培养物，在洁净载玻片上按常规涂片、干燥、固定。 4. 染色：滴加孔雀绿染液染色3min。 5. 脱色：用95%的乙醇脱色30s，水洗。 6. 复染：用番红复染30s，水洗，用吸水纸吸干。 7. 镜检：干后用油镜观察。子囊孢子呈绿色、菌体和子囊呈粉红色。 五、实验报告 结果 绘图说明酿酒酵母的营养细胞、子囊和子囊孢子的形态特征。 * * 酵母菌是多形的、不运动的单细胞真核微生物，细胞核与细胞质已有明显的分化，菌体比细菌大。繁殖方式也较复杂，无性繁殖主要是出芽生殖，仅裂殖酵母属是以分裂方式繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。本实验通过用美蓝染色浸片来观察生活的酵母形态和出芽生殖方式。 美蓝（还原型） 无色 还原剂 氧化剂 美蓝（氧化型） 蓝色 美蓝（还原型） 无色 酵母活细胞 新陈代谢 还原能力 在载玻片中央加一滴0.05%吕氏碱性美蓝染色液，用接种环挑取少量酵母菌苔，混合均匀；（注：染液不宜过多或过少） 用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上；（注：盖玻片不宜平着放下） 将制片放置约3min，先低倍镜后高倍镜观察酵母形态和出芽情况，并根据颜色区别死活细胞。 （请预习下一个实验： 实验七 霉菌的形态观察）