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第十二章 转座子 麦克林托克－－转座子的发现 第一节 转座子种类与鉴别 二、转座子鉴别 突变基因位点的确定 amam(花斑) A2A2C1C1C2C2 ×a1a1A2A2C1C1C2C2 (测验种,无色) 自主和非自主转座子的鉴别 a1a1(花斑) A2A2C1C1C2C2 ×A1A1A2A2C1C1C2C2 非自主转座子的鉴别 Ac a1a1(花斑) A2A2C1C1C2C2 × ac A1A1A2A2C1C1C2C2 第二节 重要玉米转座子系统 二、AC-DS系统 三、SPm系统 第三节 转座发生的时间与控制因子突变的性质一、转座发生的时间 二、控制因子突变的性质（略） 第四节 转座因子的分子基础 Ac中编码转座酶的长度为2421bp的ORF。有证据表明，转座酶的结合序列为目标DNA上的AAACGGG，并且需要该序列6次以上的重复才能稳定结合（Becker和Kunze, 1997）。甲基化对上述结合有很大影响，两条链上的C被甲基化后，则不能结合，只有一条链甲基化则显著影响结合。因此，甲基化可能在转座过程中发挥重要作用。 正常结合： AAACGGG TTTGCCC 结合弱化： AAA mCGGG TTT GCCC 有一系列的Ds因子，都能够引起结构基因插入突变并对Ac因子发生反应。但有可靠证据表明，并非所有Ds因子都能引起染色体断裂。只有一种称作“双重Ds”（double Ds）的类型才有使染色体断裂的能力（H. P. D?ring，1986）。这种双重Ds因子由两个只有2041bp的Ds拷贝组成，其中一个拷贝以反向方式插入另一个拷贝分子中，它的末端反向DNA序列重复4次，其他部分也以反向方式重复两次，其转座所致染色体断裂过程如图12－5。 SPm系统 控制因子利用其特定的靶子位点重复（target site duplication，TSD）DNA与受体基因相连接，插入基因座位。在它们离开插入位点时，TSD与转座因子一起消失。但在植物中，转座因子离开之后，TSD常常被遗留下来形成印迹（footprint），不过这种遗留下来的TSD，有时与原来的TSD有所不同，个别碱基可能被替代或丢失（图12-18，图12－19）。如果转座因子的插入和跳出，发生在内含子或基因前导序列（leader sequence），其后果很难觉察得到。如果发生在外显子，在遗留的TSD碱基不是3的倍数时，有可能产生移码突变（frameshift mutation），是3的倍数时，TSD碱基有可能增加少数氨基酸，使回复突变的蛋白质与原始类型有所不同 与Ac类似，Spm的活性也受甲基化影响，甲基化抑制其转座能力。但具体的调控方式还不完全清楚。Fedoroff(1995)认为，Spm 5’端至转录起始点的上游控制区域（UCR）甲基化与其失活有关。Spm编码产生的两个蛋白TNPA和TNPD是转座所必需的，两个蛋白通过与Spm端部结合，促使Spm与DNA的紧密结合。TNPA结合于Spm靠近端部的重复区域，可以使Spm启动子脱甲基化。同时，通过影响转录和转座实现Spm的调控。图12－17为Spm的分子调控模式。 控制因子利用其特定的靶子位点重复（target site duplication，TSD）DNA与受体基因相连接，插入基因座位。在它们离开插入位点时，TSD与转座因子一起消失。但在植物中，转座因子离开之后，TSD常常被遗留下来形成印迹（footprint），不过这种遗留下来的TSD，有时与原来的TSD有所不同，个别碱基可能被替代或丢失（图12-18，图12－19）。如果转座因子的插入和跳出，发生在内含子或基因前导序列（leader sequence），其后果很难觉察得到。如果发生在外显子，在遗留的TSD碱基不是3的倍数时，有可能产生移码突变（frameshift mutation），是3的倍数时，TSD碱基有可能增加少数氨基酸，使回复突变的蛋白质与原始类型有所不同。 二、诱发与活化 Spm因子（从wx-84-4得到）和I因子（从wx-m8得到）分子的基本结构与Ac和Ds因子很相似。它们分子的两端有一个由13个碱基对组成的反向重复序列TIR（CACTACAAGAAAA）。紧挨着TIR，是由以12个碱基对为基本单位（CCGACACTCTTA），以顺向或反向重复若干次，形成的各由大约200个碱基对组成的“柄”（stem），柄中间是它们的功能单位。Spm因子由8248bp组成，I因子由2.2kb组成。它们之间的6.2kb的差异导致了I因子转座能力的丧失。Spm因子在883