丙型肝炎病毒感染的抗体应答与免疫测定.pptVIP

MEFA-6融合蛋白的优点 使用这种蛋白建立的抗HCV化学发光测定方法表现了很好的测定灵敏度和特异性，测定敏感性较使用NS3-NS4-核心（C25）区融合蛋白的免疫测定方法高2～4倍。这种融合蛋白的优点是:(1)增加了重组抗原上主要决定基的数量，同时减少了不必要的氨基酸的数量，这样就提高了暴露在外的决定基的比例；（2）重复性决定基序列的存在降低了由于抗原结合于固相所致的空间位阻；（3）MEFA抗原更容易纯化。大多数酵母和大肠杆菌细胞内蛋白非常难溶，而MEFA－6蛋白主要含亲水性决定基，因此，较通常的重组多肽具有更好的可溶性，更易于纯化。 目前抗HCV ELISA检测所存在的问题 目前抗HCV检测ELISA试剂盒均采用HCV的基因工程或合成多肽抗原（核心区、NS3、NS4和NS5等）包被固相，以间接法进行测定； 由于上述HCV抗原的组合、来源及用量等方面的差异，可能会造成在临床上使用不同试剂生产厂家的ELISA试剂盒的测定结果出现较大的差异，漏检现象严重，用于献血员血液筛检，极易造成输血后患者HCV感染的出现。 为此，我们对国内4家主要抗HCV ELISA试剂生产厂家及1家国外厂家的试剂盒对临床样本的测定结果进行了分析，并与RIBA及必要的RT－PCR结果进行了比较。 不同试剂对28份较弱阳性样本测定的假阴性率 试剂 假阴性率 A 82.1% (23/28) B 32.1% ( 9/28) C 39.3% (11/28) D 57.1% (16/28) E 25.0% ( 7/28) 试剂盒组合后的测定假阴性率 试剂组合 假阴性率(%) 试剂组合 假阴性率(%) AB 21.4 AD 46.4 ABC 14.3 ADE 14.3 ABD 17.9 AE 17.9 ABE 3.6 BC 17.9 AC 32.1 BCD 14.3 ACD 28.6 BCE 3.6 ACE 10.7 BD 25.0 BDE 7.1 BE 7.1 CD 32.1 CDE 10.7 DE 17.9 抗HCV ELISA检测差异的原因 (1)不同试剂生产厂家所用HCV包被抗原在来源及组成上有差异。有的可能NS4或NS3含量较高，有的核心区抗原较多，这种情况下，既使是同一厂家的不同批试剂间亦会有较大差异。我们在实际工作中，也发现同一厂家的不同批间的抗HCV检测ELISA试剂有时也有较大的差异。 (2)所用包被抗原成份相互之间抗原决定簇的覆盖，这种覆盖将严重影响ELISA测定的敏感性。 建 议 根据上述结果,建议价在血站筛检献血员血时，初检阴性尤其是S/CO值较高的血液，最好使用至少一家国内和一家进口ELISA试剂盒复检，这样才能最大程度的减少经输血HCV感染的发生。 谢 谢! 丙型肝炎病毒感染的抗体应答与免疫测定 卫生部临床检验中心 李金明 ? 丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus, HCV)是输血后肝炎的主要病原； 目前的检测手段主要是采用ELISA方法检测献血员血中的抗HCV抗体； HCV感染者血循环中存在针对HCV不同蛋白的抗体，且具体针对某种蛋白的抗是否出现、出现的时间、持续时间长度均有所差异，因此，ELISA测定时所使用的