坛紫菜降血压活性肽的分离纯化及分子质量测定.pdf

※分析检测 食品科学 2011, Vol. 32, No. 02 213 坛紫菜降血压活性肽的分离纯化及 分子质量测定 1,2 1 1, 1 1 刘淑集 ，王 茵 ，吴成业 * ，苏永昌 ，刘智禹 (1.福建省水产研究所，福建 厦门 36 10 12 ；2 .福建农林大学食品科学学院，福建福州 350002) 摘 要：用AS.1398 中性蛋白酶酶解制备坛紫菜(Porp hy ra haitanesis)ACE 抑制肽，并经超滤膜、Sephadex G-15 凝 胶层析和反相高效液相色谱(RP-HPLC)分离纯化，纯化产物测定其氨基酸组成，并运用基质辅助激光解吸电离飞行 时间质谱(MALDI-TOF-MS)测定分子质量。结果显示：坛紫菜酶解液经超滤分离获得分子质量小于2000D 的组分 ACE 抑制活性最高，IC50 为0.73mg/mL ；该组分进行Sephadex G-15 凝胶层析分离得6 个组分，组分E 的IC50 最小， 为0.67mg/mL 。组分E 经RP-HPLC 分离得峰6 对ACE 的抑制率最高，达到89.54% ；峰6 再次过RP-HPLC ，又洗 出2 个蛋白峰，说明峰6 并不是单一物质，还需进行多次反复纯化。测定峰6 的氨基酸组成主要含有Tyr 、Val 和 Phe ，同时采用MALDI-TOF-MS 分析发现有8 个主要的质子峰，信号最强的质子峰为m/z 86 1.17 ，有4 个峰聚集 在m/z 860 左右，说明峰6 平均分子质量大约为860D ，推算出紫菜降血压肽含有3 个V al 、2 个Ph e 、1 个Tyr ， N 端为V al ，可能的排序顺序有18 种。 关键词：坛紫菜；降血压肽；A C E 抑制活性；分离；纯化；分子质量 Isolation, Purification and Molecular Weight Determination of Antihypertensive Peptides Derived from Porp hy ra haitanesis 1,2 1 1, 1 1 LIU Shu-j i ，WANG Yin ，WU Cheng-ye * ，SU Yong-chang ，LIU Zh i-yu (1. Fisheries Research Institute of Fuj ian , Xiamen 36 10 12, China ； 2. College of Food Science, Fuj ian Agriculture and Forestry University, Fuzhou 350002, China) Abstract ：Porp hy ra haitanesis was hydrolyzed with AS.1398 neutral protease, and the hydrolysate was filtrated sequentially through ultra-filtration membranes with molecular weight cutoff (MWCO) 2000 D and 8000 D to obtain the fraction with the highest ACE-inhibitory activity, of which the molecu