高效液相色谱-定性和定量课件.pptx

高效液相色谱-定性和定量 色谱定性定量 • • 色谱分析的目的 (1)对未知组分进行定性分析 (2) 对已知组分进行定量分析 根据色谱图上某个色谱峰的保留时间和该 色谱峰在检测器上的响应强度，对该谱峰 初步定性和定量分析 山东鲁健检测技术服务有限公司 定性分析 定性分析 1、利用保留值定性-----最基本的方法； 基本依据是两个相同的物质在相同的 色谱条件下应该有相同的保留值；但相反 结论却不成立，即相同色谱条件下，具有 相同保留值的两个物质不一定是同一个物 质，尚需其他一些辅助技术来确认。 2、利用两谱联用定性； 3、其他方法定性 山东鲁健检测技术服务有限公司 定性分析—保留值定性 （ 1）已知物保留值直接对照法定性 　 未知峰保留值(保留时间或保留体积)与 某标准物完全相同，可初步确定为同一物 质；改变色谱柱或流动相组成，二者保留 值仍完全相同，则可认定为同一物质 　 优点：简单 缺点：适用范围窄；必须有标准物质 山东鲁健检测技术服务有限公司 定性分析—保留值定性 山东鲁健检测技术服务有限公司 定性分析—保留值定性 （2） 利用文献保留值数据进行比对定性 文献报道的保留值数据只能作为定性参 考。因为仪器 、色谱柱、试剂等条件不一 致，很难重现到文献报到的数据。可以根 据文献数据和对照品先初步定性，再用已 知标准物进行定性 山东鲁健检测技术服务有限公司 定性分析—保留值定性 （3） 利用已知物增加峰高法定性 将已知标准物质加到待测样品，若某一峰 增高，且改变色谱柱或流动相组成后仍能使 该峰增高，则可基本认定该峰与已知标准物 为同一物质 山东鲁健检测技术服务有限公司 定性分析—保留值定性 （4 ）用三维图谱检测器定性 　 如果HPLC仪配备有三维图谱检测器， 除比较未知组分与已知标准物保留时间外 ，还可比较两峰的立体结构。　 二极管阵列检测器可同时比较保留时间 和紫外光谱图。如果两项均一样，则可基 本上确定为同一物质；如果保留时间一样 ，而紫外图谱有较大差别，则判定两者不 是同一物质 山东鲁健检测技术服务有限公司 定性分析—两谱联用定性 如果标准物质缺乏或难以获得；或由于结构 、理化性质相似，很多物质具有十分接近，甚至 相同的保留值，则保留值定性准确度存在疑问。 红外光谱、紫外光谱、核磁共振波谱和质谱 对有机化合物有很强的定性能力，可用于定性。 目前HPLC-MS和HPLC-NMR 已作为液相色谱的常 规检测器使用，技术也十分成熟。 山东鲁健检测技术服务有限公司 定性分析—两谱联用定性 （1 ）色谱-质谱联用（HPLC-MS） 　质谱属于液相色谱的广适性检测器 　 普通高效液相系统只能对已知化合物（有标准 品的化合物）通过峰位保留值定性，对未知化 合物无能为力。高效液相色谱—质谱联用可对 未知化合物做多级质谱分析，通过多级质谱碎 片推测未知化合物结构，进而准确定性 山东鲁健检测技术服务有限公司 定性分析—两谱联用定性 1983年开发串联质谱技术问世，发展十分迅 速，已被作为成熟技术，广泛用于许多领域，特 别是药学领域，并发挥了巨大作用. 中药及植物药化学成分的快速筛选； 中药品种、道地药材的鉴别； 中药质量标准研究； 药代动力学和药物代谢产物研究； 非法掺假； 刑事侦察；兴奋剂筛查；环境保护 山东鲁健检测技术服务有限公司 定性分析—两谱联用定性 （2） 　 色谱-核磁共振联用（HPLC-NMR） NMR 是迄今为止功能强大的结构研究手段 ，可彻底解决多数有机物的化学结构问题，且对 所有含检测核的化合物均有响应，具有极大的通 用性。 　 与HPLC 联用要求有良好的色谱分离，但对 色谱条件要求不高，普通色谱柱即可适于药物杂 质鉴定、药物体内外代谢产物的结构鉴定、天然 产物化学筛选等 山东鲁健检测技术服务有限公司 定性分析—其他方法 （1 ）收集洗脱物后进行定性分析 　 收集色谱分离后的每一个分离组分，对所得组分 分别进行仪器、化学分析或其他物理参数（如熔 点、沸点、折光、旋光等）测定 山东鲁健检测技术服务有限公司 定性分析—其他方法 • 收集组分时应注意 某些情形，如色谱分析，宜采用非破坏性检测 器，电化学检测器不可；如使用破坏性检测器， 则须在检测器前分流，使分离后的一小部分组分 进入检测器 • • 尽量考虑前后组分的影响，特别是分离不完全的 组分 只收集峰顶附近组分，以消除定性时相邻组分的 干扰 • • 注意流动相中溶剂杂质的影响 注意色谱分离后组分被检测和被收集间的时差 山东鲁健检测技术服务有限公司 定性分析—其他方法 （2）化学衍生法定性 利用样品中某些化合物与特征试剂柱前或柱 后存在的化学反应生成相应衍生物进行定性。 适于官能团定性。 山东鲁健检测技术服务有限公司 定量分析 定量分析 • • 常用定量分析方法 归一化法