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血细胞分析仪原理一 重点 : 血液分析仪测定的原理、方法 血液分析仪功能：①全血细胞计数功能。 ②白细胞分类功能。③扩展功能。 血液分析仪优势 检测项目多 速度快 精度高 易操作 §2 检测原理 检测原理 电学 光学 电阻抗法 射频电导法 激光散射法 分光光度法 血细胞计数原理 悬浮在电解质溶液中的血细胞相对于电解质溶液为非导电颗粒，其电阻比溶液大。利用两者导电性能的差异，当体积大小不同的血细胞通过计数小孔时，可引起小孔内，外电流或内电压的变化，形成与血细胞数量相当，体积大小相应的脉冲电压，从而间接区分血细胞群，并分别计数即电阻抗原理（库尔特原理） 一、电阻抗法 血细胞计数原理即库尔特原理（Coulter principle):根据血细胞非传导的性质，以电解质溶液中悬浮的血细胞在通过计数小孔时引起的电阻变化进行检测为基础，进行血细胞计数和体积测定。 小孔管是电阻抗法细胞计数的一个重要组成部分。检测期间，当电流接通后，位于小孔两侧的电极产生稳定的电流。如果供给的阻抗也是稳定的，则小孔的电压是不变的。 当有一个细胞通过小孔时，由于电阻增加，于瞬间引起电压变化——通过脉冲。 细胞体积越大，脉冲振幅越高；细胞数量越多，脉冲数量也越多。 脉冲信号经过下列步骤，得出细胞计数结果： 放大 由于血细胞通过微孔时产生的脉冲信号微弱，必须通过放大器将讯号放大。 2. 阈值调节 在一定范围内调节参考电平的大小，使计数结果尽可能符合实际。 3. 甄别 利用甄别器根据阈值调节器提供的参考电平，将低于参考电平的假讯号（细胞碎片，杂质微粒）去掉。 4. 整形 通过整形器作用，将脉冲讯号波形修整成一致标准的平顶波，才能触发电路 5 计数 血细胞的脉冲信号 放大 甄别 整形后，送入计数系统，得出计数结果。 电阻抗法可准确测量出细胞（或类似颗粒）的大小，是三分群血液分析仪的主要应用原理，并与光学检测原理组合应用于五分类血液分析仪中。 三分群血液分析仪基本组成 ① 信号发生器 各种微粒通过检测小孔产生电阻抗脉冲信号的检测源。 ②放大器 将血细胞微弱脉冲信号放大以触发电路系统。 ③阈值调节器 调节能区分不同群细胞合适的信号电平。 ④甄别器 去除非参考电平的各种假信号以提高计数的准确性。 ⑤整形器 将不一致的脉冲波形信号调整为标准的波形后触发计数电路系统。 ⑥计数系统 将整形后的血细胞脉冲信号显示为不同类群的细胞数。 二、激光散射法 激光散射法应用了流式细胞术(flow cytometry, FCM) 检测原理。 流式细胞术检测原理：细胞通过激光束被照射时，产生与细胞特征相应的各种角度的散射光。对经信号检测器接收的散射光信息进行综合分析，即可准确区分正常类型的细胞。 半导体激光的流式细胞术 侧向荧光（RNA/DNA含量） 激光 （波长633nm） 侧向散射 （细胞内部结构，如核的大小） 前向散射光 （细胞大小） 低角度散射光（前向散射光）：反映细胞的数量和表面体积大小。 高角度散射光（侧向散射光）：反映细胞的内部颗粒、细胞核等复杂性。 激光散射法在区别体积相同而类型不同的细胞特征时，比电阻抗法分群更加准确。故激光散射法已成为现代五分类血液分析仪的主要检测原理之一。 流式细胞仪的技术特点 流式细胞仪在设计上采用了许多独特的技术，比如液流系统、光路系统、信号测量和细胞分选方面都有自己的技术特点。着重讲述液流系统——鞘流原理。 通常把标本流的流速控制在10m/s以内，就能保持标本流处于稳流状态。 外面包被有高速流动的鞘液，实现标本与鞘液稳定的同轴流动状态。 同时利用液流聚焦原理，使标本流直径变小，通常只有10～20μm，避免细胞多个重叠进入检测区。