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基因工程知识点图解 1、 ［反 ［反转录酶 杂交双链 （单链RNA/单链DNA） MtiSDNA | DNA聚合酶 双链DNA （目的基因） DNA连接酶与DNA聚合酶的比较 DNA连接酶 DNA聚合醃 相同点 催化两个脱氧核昔酸之间形成磷酸二酯键 不 同 点 模板 不需耍模板 以DNA的一条琏为模板 作用 对象 游离的DNA片段 单个的脱氧核昔酸 形成完整的DNA分子 形成DNA的一条链 用途 基因工程 DNA复制 2、人工合成FI的基因 反转录法： 根据已知的氨基酸 序列合成DNA法: 目的基因的mRNA 蛋白质的氨基酸序列 !推测 mRNA的核昔酸序列 I推测 基因的脱氧核昔酸序列 |化学合成 基因组文库的构建模式 基因厨DNA限?性内切?CDN蚊库脚輾式图— =： DNA片段携到敘体上进入细㈱ 寄主细胞DNA受体菌的整个群体包含了这种生物的全部基因——某种生物的刪 反转录酶 基因组文库的构建模式 基因厨DNA 限?性内切? CDN蚊库脚輾式图 — =： DNA 片段 携到敘体上 进入细㈱ 寄主细胞DNA 受体菌的整个群体包含了这种生物的全部基因 ——某种生物的刪 反转录酶 —— 械双链 （单链RNA/戦DNA） 某种酶 单链DNA DNA聚合酶 双链DNA （cDNA） 与鮒连接后导入受体菌It荊组成cDNA文库 4、真核细胞的基因结构编码冈外显子内含子非编解列原核、真核基因表达比较 4、 真核细胞的基因结构 编码冈 外显子内含子 非编解列 原核、真核基因表达比较 - 编码［X 非编码区r 2菲编码区 转录mRNA|翻译初始mRNA多肽链 COCCCCOO［剪接 转录 mRNA |翻译 初始mRNA 多肽链 COCCCCOO ［剪接 成熟mRNA 出核孔翻译 多肽链5、利用PCR技术扩增目的基因 inwnnnTnTrVi〕11 inwnnnTnTrVi〕11 mh niHrniirn — irnnnniTiiiiirnnirmiliiii nnnnii iron iiOtii 1.变性(90￡-95￡) 双链DNA模板在热作 用下，氢键断裂, 形成单链DNA 2.复性(55°C-65°C) 2.复性(55°C-65°C) 温度降低，引物与 DNA模板结合，形成 局部双链。 3.延伸(70°C-75°C) 在Taq酶 的作用下, $ fWnnnHW-nnWrnnjrniinnnTnwTnnrnn 叫町 U JUidii血 阵蒔葡亥昔酸,合 ?、、八「「\「；、厂/成与模板互补的DNA y SiSifiSlSuuAiuiiwyjWi^imj^ 严 ° PCR技术与DNA复制的比较 用相同的限制核酸内 切酶分别切割目的基因和 载体DNA （如质粒），目 的基因和载体DNA的两端 形成相同 用相同的限制核酸内 切酶分别切割目的基因和 载体DNA （如质粒），目 的基因和载体DNA的两端 形成相同的黏性末端，在 DNA连接酶的作用下，将 目的基因和载体DNA连接 在一起，形成重组DNA分 1! 质粒 DNA分子 同一种 限制酶处理 —个切口（位点）两个切口（位点）两个黏性末端获得目的基因 DNA复制 PCR技术 不 解旋方式 解旋酶催化 高温变性解旋 场所 细胞内 主要在细胞核内 细胞外 主要在PCR扩增仪内 同 酶 解旋酶.普通的 DNA聚合酶等 耐热的DNA聚 合酶（Taq酶） 点 温度条件 细胞内温和条件 需控制温度， 在较高温度下进行 引物 不需要 需宴（一对） 联系 模板*原料均相同 子。DNA连接酶 子。 、f 重组DNA分子（重组质粒） 8、 总结 基因工程相关原理 1） 目的基因与受体细胞DNA分子相互整合的原理：两者的组成成分及结构基本相同 2） 目的基因在受体细胞内表达合成蛋白质的原理：目的基因通过转录和翻译表达遗传信息 3） 目的基因在受体细胞内能表达与供体生物相同产物的原理：生物共用一套遗传密码 4） 基因工程育种的原理：基因重组 9、 用转基因的动物生产药物 方法：乳腺生物反应器 ★为什么乳腺能成为基因药物最理想的表 达场所呢？ ⑴乳腺是一个外分泌器官，乳汁不进入体 内循环，不会影响转基因动物本身的生理 代谢反应。 ⑵从乳汁中获取目的基因产物，产量高, 易提纯，表达的蛋白质己经过充分的修饰 加工，具有稳定的生物活性。 ⑶从乳汁中源源不断获得目的基因的产物 的同时，转基因动物又可无限繁殖。