凯基TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒.docxVIP

凯基TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒（通用） （BIOTIN标记POD法,适用于细胞.组织样本） 使用说明书 一、TUNEL制品说明 凯基TUXEL细胞凋亡检测试剂盒是用来检测细胞在凋亡过程屮细胞核DNA 的断裂情况，其原理是牛物素（biotin）标记的dUTP在脱氣核糖核甘酸末端转 移酶（TdT Enzyme）的作用下，可以连接到凋亡细胞中断裂的DNA的3 -011末端, 并可与连接了的辣根过氧化酶的链霉亲和素（Streptavidin-HRP）特异结合，在 辣根过氧化酶底物二氨基联苯胺（DAB）的存在下，产生很强的颜色反应（呈深 棕色），特异准确地定位正在凋亡的细胞，因而在普通显微镜下即可观察和计数 凋亡细胞；由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂，因而没有3-0H 形成，很少能够被染色。 本试剂盒适用于组织样本（石蜡包埋、冰冻和超薄切片）和细胞样本（细胞 涂片）的凋亡原位检测。 本试剂盒特点 ?操作简便：使用Ready-to-Use型试剂，并配有Proteinase K和DAB。 ?高灵敏度：可以单一检出初期的凋亡细胞。 ?高特异性：能特异性染色凋亡细胞。 ?快速操作：整休操作约需3小时。 ?用途广泛：可应用于组织切片、细胞样本等。 ?方便观察：使用光学显微镜观察实验结果。 ?高正确性：冇阳性对照片的制备方法，可以确认试剂盒的冇效性 使用注意事项 使用前请认真阅读本说明书，提前准备好相关试剂。 因木试剂盒中组分均为微量，使用前请离心集液。 为避免试验误差、降低试剂的损耗，建议使用精密度高的进口微量移液枪及 枪头。 TdT 反应液最好在使用前根据样木数量集屮配制，再分别滴加于各样木片 上，避免每个样本单独配制而产生的试剂损耗。 为防止样本脱落，请使用硅烷(Silane)处理的载玻片或采用多聚赖氨酸铺片。 固定好的样木可以在-20°C的70%乙醇屮放置30分钟或至过夜，以改善细胞的渗透性。 使用PBS清洗细胞样本吋，不耍直接加在细胞样本上，以防止细胞样本的脱落。 进行PBS淸洗时，以5分钟清洗3次为标准。 DAB为固体粉末,使用前加入PBS配制成20XDAB (10 mg/ml)后，按说明 书显色使用。 二、TUNEL试剂盒组分 组份 Cat: KGA702 Cat: KGA703 Cat: KGA704 储存条 件 20 assays 50 assays 100 assays Equilibration Buffer 1. 0 mL 2. 5 mL 5. 0 mL -20 °C Biotin-ll-dUTP 20 uL 50 uL 100 uL -20 °C TdT Enzymo 80 uL 200 nL 400 uL -20 °C 50XProteinase K 40 uL 100 uL 200 u L -20 °C Streptcivid in-I1RP IOpL 25 uL 50 uL 4°C避 光 DAB 2mg 5mg 10 mg -20 °C 试剂盒以外自备仪器和试剂 光学显微镜、37°C孵箱、微量移液器、染色湿盒、盖玻片、载玻片、染色缸。 二甲苯、多聚甲醛、PBS、H2O2、TritonX-100.柠檬酸钠、复染染液：苏木素或 甲基绿等。 三、操作流程概览 四、检测样本的预处理 TUNEL检测时样木的预处理是试验的关键所在，木说明书推荐的条件仅为 普遍情况，用户需根据口已的样木材料及首次试验结果來调整各个条件（参照 Page 9},如处理时间、处理浓度等，来优化出适合自身样本的试验条件，从而 做出客观的试验结果。 细胞样本的准备 操作注意事项: 为防止样木脱落，请使用硅烷（Silano）处理的载玻片或采用多聚赖氨酸铺片。 使用PBS清洗细胞样本时，不耍直接加在细胞样本上，以防止细胞样本的脱落。 进行PBS清洗时，以5分钟清洗3次为标准。 固定液、PBS、封闭液、通透液、染色缸需用户自备，请按上述方法配制。 五、标记和显色反应 预处理好的样本PBS潦洗两次，样本周围用魔水纸吸干 每个样本滴加504 L TdT 81反应板，加盖股片37C琏光湿润反应dOniiii (TdT IHJfcSffts 45 U- L Equilibration Buffer +1 I^L Biotinnll-dUTP -M HL TcTT Enzyae.需新鲜配齢(阴性对照片不加TdT St) PBS 样本周餌吸水勰干 滴加5OPL StreptavidinnHRP ZEfRft.加盖玻片37C跟润睡光反应30min. (Strep-tavidiii-HRP 工作板=0. 5U-L StreptavidinrHET-l-SS? 5U L PBS) 操作注意事项： 进行PBS清洗时，以5分钟清洗3次为标准。 PBS清洗后，为了