分子生物学与基因工程.docxVIP

绪论 分子生物学 广义：研究蛋白质及核酸等生物大分子结构和功能，也就是从分子水平阐明生 命现象和生物学规律。 狭义：研究生物体主要遗传物质一一基因或DNA的结构及其复制、转录、表达 和调节控制等过程的科学。 基因工程:是指将一种或多种生物体的基因或基因组提取出来，或者人工合成的基因，按照 人们的愿望，进行严密的设计，经过体外加工重组，通过一定的方法，转移到另一种生物 体的细胞内，使之能在受体细胞遗传并获得新的遗传性状的技术。 里程碑事件：1944年，Avery在肺炎双球菌转化实验中证实了 D7A是遗传的物质基础，标志 着分子生物学的诞生。 1953年，Watson和Crick提出DNA双螺旋模型，为分子生物学的发展奠定了坚实的基础。 1961年，法国科学家Jacob和Monod提出了乳糖操纵子模型。 1972年，Berg构建了世界上第一个重组DNA分子，开辟了生物学新领域一一遗传工程。 1983年，Mullis发明了聚合酶链式反应（PCR）技术，极大地推动了分子生物学的发展。 90年代，开展了 “人类基因组计划”和模式生物的基因组测序，分子生物学进入“基因组 时代”。目前，分子生物学进入了 “后基因组时代”或“蛋白质组时代”。 第二讲 核酸的化学成分：核酸是一种高分子的化合物，它的构成单元是核昔酸，是核昔酸的多聚体。 核昔酸分子由三个部分组成： 碱基：喘唳、瞟吟 五碳糖：核糖或脱氧核糖核昔酸 磷酸 脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA） （1） DNA含的糖分子是脱氧核糖，RNA含的是核糖； （2） DM含有的碱基是腺噪吟（A）、胞喘唳（C）、鸟卩票吟（G）和胸腺喀噪（T）, RM含有 的碱基前3个与DNA完全相同，只有最后一个胸腺卩密吸被尿喀唏（U）所代替； （3） DNA通常是双链，而RNA主要为单链； （4） DNA的分子链一般较长，而RNA分子链较短。 核酸的分布：真核生物的绝大部分DNA存在于细胞核内的染色体上，它是构成染色体的主要 成分2—，还有少量的DNA存在于细胞质屮的叶绿体、线粒体等细胞器内。RNA在细胞核 和细胞质中都有，核内则更多地集中在核仁上，少量在染色体上。细菌也含有DNA和RNA； 多数噬菌体只有DNA ；多数植物病毒只有RNA；动物病毒有些含有RNA,有些含有DNA。 间接证据：（1） 一种生物不同组织的细胞，不论年龄大小，功能如何，它的DMA含量是恒定 的，而生殖细胞精子的DNA含量则刚好是体细胞的一半。多倍体生物细胞的DNA含量是按其 染色体倍数性的增加而递增的，但细胞核里的蛋白质并没有相似的分布规律。 （2） DNA在代谢上较稳定。 （3） DNA是所有生物的染色体所共有的，而某些生物的染色体上则没有蛋白质。 （4） DNA通常只存在于细胞核染色体上，但某些能自体复制的细胞器，如线粒体、叶绿体 有其自己的DNAo （5） 在各类生物屮能引起DNA结构改变的化学物质都可引起基因突变。 直接证据：肺炎链球菌试验；噬菌体侵染实验；烟草花叶病毒侵染烟草实验（RNA） DMA结构：多核昔酸链片段（一级）；双螺旋结构（二级） （1）两条多核昔酸链以右手螺旋的形式彼此以一定的空间距离，平行地环绕于同一轴上； （2） 两条多核苜酸链走向为反向平行，即一条链磷酸二酯键为5, —3,方向，而另一条为 3 — 5方向，二者刚好相反； （3） 每条长链的内侧是扁平的盘状碱基，碱基一方面与脱氧核糖相联系，另一方面通过? 键与它互补的碱基相联系。互补碱基対A与T之间形成两对?氢键，而C与G之间形成三対氢 键。上下碱基对之间的距离为0. 34nm； （4） 每个螺旋为3. 4nm长，刚好含有10个碱基对，其直径约为2nm； （5） 在双螺旋分子的表面大沟和小沟交替出现。 维持双螺旋结构稳定性的力：（1）盘键（2）疏水作用一一碱基堆集力（3）范徳华力（4） 磷酸基的负电荷静电斥力（5）碱基分子内能 Tm：是指吸收值增加的中点。影响因素：1） DNA序列中G + C的含量或比例，含量越高， Tm值也越大（决定性因素）；2）溶液的离子强度；3）核酸分子的长度有关：核酸分子越 长，Tni值越大；4）某些化学物质；5）溶液pH值 Z-DNA是左手螺旋，每个螺旋含12个碱基对，比A-DNA拧得更紧;双螺旋中不存在深沟，只 有浅沟…… DNA的精细结构 （1） 依赖于序列的B-DNA构象变化：双螺旋的许多结构参数是随碱基序列的不同而在一定 范围内变化的，这称为DNA的局部构彖。在DNA中，随碱基序列的不同而变化的参数有许多, 其中重要的有螺旋扭转角、螺旋桨扭角、碱基对转动角等，此外碱基对间还会发生滑动。以 上这些变化使DNA形成了精细结构。而精细结构正是DNA发挥功能时，相应蛋白质因子与靶 位点作专一性识别和结合的标志。 （2）