实验一蛋白质及氨基酸的显色反应验证课件.pptVIP

实验一 蛋白质及氨基酸的显色反应(验证);实验一、 蛋白质及氨基酸的显色反应 ;Ⅰ、双缩脲反应 (Biurea reaction) ;紫红色铜双缩脲复合物分子结构为： ; 蛋白质和多肽都有双缩脲反应，但有双缩脲反应的物质不一定都是蛋白质或多肽。此反应所产生颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关。 ;操作步骤 一、取少量尿素结晶，放入干燥试管中，用微火加热使尿素熔化。熔化的尿素开始硬化时，停止加热，尿素放出氨，形成双缩脲。冷却后，加10%NaOH溶液约1mL，振荡混匀，再加入1%CuSO４溶液1滴，振荡之。观察出现的粉红颜色。避免添加过量硫酸铜，生成的蓝色氢氧化铜能掩盖粉红色。 二、取另一支试管，加1mL卵清蛋白溶液和10%氢氧化钠溶液2mL，摇匀，再加1%硫酸铜溶液两滴，随加随摇，观察紫玫瑰色的出现。;Ⅱ、茚三酮反应 (Ninhydrin reaction); 此反应的适宜pH为5-7。该反应十分灵敏，1：1 500 000浓度的氨基酸水溶液即能显示反应，是一种常用的氨基酸定量方法。 ;操作步骤 一、取2支试管分别加入蛋白质溶液和0.5%甘氨酸溶液1mL，再加0.5mL0.1%茚三酮水溶液混匀，在沸水浴中加热1-2min，观察颜色由粉色变成紫红色再变蓝。 二、在一小片滤纸上滴上一滴0.5%的甘氨酸溶液，风干后，再在原处滴0.1%的茚三酮乙醇溶液一滴，在微火旁烘干显色，观察紫红色斑点的出现。;Ⅲ、黄色反应 (Xanthoproteic reaction) ;操作步骤: 一、取一支试管加4滴0.5%苯酚溶液，再加浓硝酸2滴，观察黄色出现，冷却后逐滴加入10%氢氧化钠溶液，观察颜色转变为橙色。 二、取一支试管加蛋白质溶液4滴及浓硝酸2滴，由于强酸的作用，开始蛋白质形成白色沉淀，小火加热，则沉淀变为黄色，冷却，逐滴加入10%氢氧化钠溶液，颜色由黄色转变成深橙黄色。 三、剪少许指甲或头发放入试管中，加入数滴浓硝酸，观察颜色变化。;管号;Ⅳ、坂口反应 (Sakaguchi reaction; 生成的氨被次溴酸钠或次氯酸钠氧化生成氮。该反应中过量的次溴酸钠或次氯酸钠是不利的，因其能进一步缓慢氧化，使产物破裂分解，引起颜色消失。但加入适量尿素可破坏过量的次溴酸钠。 该反应灵敏度达 1：250 000。因此常用于定量测定精氨酸的含量和定性鉴定含有精氨酸的蛋白质。;操作步骤 取3支试管，分别加入1mL蒸馏水、0.3%精氨酸溶液和蛋白溶液，各加20%氢氧化钠溶液5滴，1%α-萘酚酒精溶液3滴，次氯酸钠溶液6滴，摇匀，放置片刻，观察出现的颜色。;　　试剂 　（滴） 管号;Ⅴ、乙醛酸反应 (Adamkiewica-Hopkins-Cole reaction) ;操作步骤 向试管中加数滴蛋白质溶液，再加冰醋酸 (常含有少量乙醛酸或醛类)约1mL并混匀倾斜试管，谨慎地沿着管壁加浓硫酸(AR)约1mL，使其重迭，且勿使二者混合。静置后，观察在两液界面上出现的红紫色环，于水浴中微热，可加快色环形成。 用20%的白明胶作乙醛酸反应。观察结果。 ; 试剂 （滴） 管号;Ⅵ、偶氮反应 (Azo reaction) ;操作步骤 取2支试管，分别加入0.3%组氨酸溶液和纯鸡蛋清各4滴，再各加入新配制的重氮试剂8滴摇匀，加入2滴20%氢氧化钠溶液，再摇匀。过几分钟，观察颜色的形成，一般出现樱桃红色。 ; 试剂 （滴） 管号;反应名称;试剂和器材;7.浓硝酸和浓硫酸(A.R.) 8.0.1%茚三酮水溶液 9.0.3%精氨酸溶液、0.3%组氨酸溶液、0.5%甘氨酸 10.纯鸡蛋清 11.1%α-萘酚乙醇溶液，临用时配制 12.冰醋酸 13.20%明胶溶液 14.次氯酸钠溶液 15.重氮试剂： 溶液 A：溶解5g亚硝酸钠于1 000mL水中。 溶液 B：溶解5g对氨基苯磺酸于1 000mL水中。溶解后，再加入5mL浓硫酸。 A、B溶液分别保存于密闭瓶内。需用时，以1：1的比例混合。;二、器材 1.试管及试管架 2.水浴锅 3.酒精灯 4.量筒(10mL) 5.滤纸片 6.烘箱; 实验注意事项：;思考题;实验一 蛋白质及氨基酸的显色反应