基因工程《生物技术与生活》《生物技术概论》课件-视图选择纯黑白即可使用说课材料.ppt

现代生命技术的核心;DNA重组 基因克隆载体 目的基因 重组DNA导入受体细胞 重组子的鉴定 基因工程的应用;基因工程研究的理论依据;mRNA; DNA重组 在自然界，生物体内时刻发生DNA的重组, 导致基因重组，呈现对生物有利或有害的变 异。这种重组一般不受人们的意志控制，重 组结果难以预测。而基因工程涉及的DNA重组 是根据人们的愿望，进行严密设计，在生物 体外通过人为的DNA片段化和连接重组，产生 新的重组DNA分子，使其遗传信息发生预期的 变化。;重组DNA技术的重大突破带动了现代生物技术的兴 起，并很快产生了许多生命科学的高技术产业。 重组DNA技术，又称为基因或分子克隆技术，是基 因工程的核心技术。DNA是基因工程操作的主要对 象。;基因工程;脱氧核苷 + 磷酸 脱氧核苷酸;脱氧核苷酸;脱氧核苷酸的有机碱分为两类；一类是嘌呤，是双 环分子；一类是嘧啶，是单环分子。 嘌呤包括腺嘌呤(A)和鸟嘌呤(G)2种 嘧啶有胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)2种。;成为DNA的基本 结构。; DNA双链结构 碱基互补配对：A与T配对、 G与C配对，通过氢键相连形成 双链结构；并且G=C（三条氢键）、A=T（两条氢键）。 DNA变性：当温度超过90℃时，氢键断裂而解链成单链DNA。 DNA复性：高温变性的DNA被逐渐冷却时，分开的两条单链 又重新结合成双链DNA的过程。 书写顺序：以5’ → 3’走向的单链DNA的核苷酸序列来表示。 如DNA片段 5’-GATCATGCATC-3’ 3’-CTAGTACGTAG-5’;DNA分子的结构特征;DNA一级结构;DNA的二级结构(双螺旋);DNA的功能;基因工程;转录——遗传信息从DNA传递给;启动子——转录过程中RNA聚合酶识别和结合的;遗传密码;第 一 密 码;基因工程中的工具酶;基因工程; 限制性内切酶的命名 限制酶由三部分构成，即菌种名、菌系 编号、分离顺序。; 限制性内切酶的特点 1. 识别顺序和酶切位点 １）识别４-8个相连的核苷酸;Pst I;G A A T T C;C T G C A G;基因工程; 同裂酶（isoschizomer） 1. 定义 能识别相同序列但来源不同的两种或多种限制 酶。同裂酶产生同样切割，形成同样的末端，酶切 后所得??的DNA片段经连接后所形成重组序列，仍 可能被原来的限制酶所切割。 2. 特点 1）识别相同顺序 2）切割位点异、同;基因工程;酶名称;基因工程;限制酶切割DNA分子示意图;DNA连接酶的连接作用示意图;200多种限制性内切酶，切点各不相同。;基因工程;基因工程;限制性内切酶酶切DNA的方法;限制性内切酶酶切DNA的方法; PCR扩增技术 聚合酶链式反应（polymerase chain reaction） 即PCR法，是一种在体外快速扩增特定DNA序列 的新技术。PCR技术只需数小时，就可在体外将 该特定的基因扩增百万倍，免除了基因重组和分 子克隆等一系列繁琐操作。; PCR基本原理 模仿细胞内发生的DNA复制过程进行 的,以DNA互补链聚合反应为基础，通过靶 DNA变性、引物与模板DNA一侧的互补序列 复性杂交、耐热性DNA聚合酶催化引物延伸 等过程的多次循环，产生待扩增的特异性 DNA片段。;——;基因工程;PCR扩 增过程;?;?;PCR扩增方式; 耐热性DNA聚合酶 耐热性DNA聚合酶的发现使PCR扩增特异性 DNA片段成为可能。由于这种酶在靶DNA变性的 高温下仍保持活性，所以在PCR扩增特异性DNA 片段的全过程中 ，只需一次性加入反应系统中， 不必在每次高温变性处理后再添加酶。目前用于 PCR的耐热性 DNA聚合酶主要有： Taq DNA聚合酶、 Pwo DNA聚合酶、 Tth DNA聚合酶、C.them DNA聚合酶。;基因工程;基因工程;基因工程;基因工程; 载体的选择 是一个有自我复制能力的复制子（replicon) 能在受体细胞内大量增殖，即有较高的复制率。 载体上最好只有一个限制性内切核酸酶的切口， 使目的基因能固定地整合到载体DNA的一定位置上。 载体上必须有一种选择遗传标记，以便及时将“工 程菌”选择出来。;基因工程;术语解释;基因工程;质粒的一般生物学特性;质粒的一般生物学特性;质粒的一般生物学特性;质粒的拷贝数与不亲和性;Amp;Amp;pUC18和pUC19质粒载体;基因工程;基因工程;Ti质粒;基因工程;基因工程;? T-克隆载体两条链的5’端含有一个游离的T ? PCR过程中，普通的Taq酶可在产物的3’端多;基因工程;噬菌体感染细菌示意图;λ噬菌体克隆载体;? λDNA构建克隆载体的依据;柯斯（Cosmid）质粒载体;