生科1102-胡云杰开题报告.docVIP

PAGE PAGE 5 本 科 毕 业 设 计 开 题 报 告 题 目 麦草畏及2,4-D对西洋参体细胞胚胎发生比较研究 学生姓名 胡云杰 学号 1112014043 所在院(系) 生物科学与工程学院 专业班级 生科1102班 指导教师 曹小勇 2015 年 3  题 目 麦草畏及2,4-D对西洋参体细胞胚胎发生比较研究 一、选题的目的及研究意义 西洋参(Panax quinquefolium L.)又名花旗参、美国参、洋参、广东参，系五加科人参属多年生草本植物，原产美国和加拿大。西洋参种植为汉中的特色产业，在全国参业界有一定影响；通过利用西洋参离体培养技术，诱导胚性愈伤组织及胚状体发生，形成无性系克隆，为西洋参的优良个体选育工作提供快速繁殖技术基础；目前通常利用2,4-D诱导体细胞胚胎发生，尚未见到麦草畏对西洋参体细胞胚胎发生影响的研究报道。本研究以西洋参合子胚与种子胚为材料，以2,4-D为对照，评价不同浓度麦草畏对体细胞胚胎发生影响，确定麦草畏在西洋参体细胞胚胎发生中的作用，为西洋参体细胞胚胎发生积累相关资料。 二、综述与本课题相关领域的研究现状、发展趋势、研究方法及应用领域等 1、研究现状 （1）西洋参胚状体的诱导 主要存在两种方式：①直接在外植体上发生；②先产生愈伤组织，愈伤组织再分化形成。 西洋参组织在离体培养的条件上也可直接发生胚状体，但相关报道较少。阳建国[1]在西洋参的组织培养及应用前景一文中，在附加2,4-D和KT的MS培养基上，仅十天左右就出现淡黄色粘稠的愈伤组织，结构紧密，他认为是胚状体。且2,4-D浓度为2.0mg/L时，发生率较高。 关于西洋参愈伤组织诱导出胚状体的报导很多，西洋参的种胚、根髓、成熟根、叶片、子叶、上胚轴，胚轴来源的愈伤组织均能诱导出胚状体。Wang[2]用西洋参根外植体在附加2,4-D(2mg/L)和KT(1mg/L)的培养基上，诱导形成胚性愈伤组织。Tirajoh [3]以西洋参三种外植体(根、上胚轴)研究附加不同生长调节物的MS培养基上体细胞胚胎的发生。体细胞胚胎形成平均为：根 15.6％(3个月后)，上胚轴 2％(6个月后)，由于这些胚萌发形成茎但没有根，因此未能形成完整小植株。Zhou等[4]建立了西洋参有效的离体生产方法；对子叶外植体用1.0M蔗糖4℃下进行预处理，改善胚的质量，结合诱导培养基中高蔗糖含量(7%)，胚胎发生的频率由40% 提高75%，而每个外植体胚胎发生数量由10个提高到21个。胚性愈伤组织在含有生长素的培养基上继代培养时，可继续增殖并不断分化出胚状体。在愈伤组织上形成的胚状体，如不及时转移亦可愈伤组织化而再生成胚状体[5]。2,4-D和NAA是诱导西洋参胚状体发生的有效植物生长调节物质，与大多数植物组织培养中要求降低生长素浓度以诱导胚状体发生的情况不一样，西洋参对生长素，特别是2,4-D有较高要求，不仅诱导愈伤组织需要，而且胚状体发生时也需要[6,7] 西洋参胚状体的发生是不同步的，同一组织上分化的胚状体，有球形的、心形的，鱼蕾形的和子叶形的。其中子叶形的胚状体十分容易长出根、芽和真叶。进一步培养可形成完整植株。在激素的影响下，胚状体的发生常常是畸形的，如三子叶、多子叶。这可能是由于多个胚状体的基部连在一起，形成不易分离的胚状体群。畸形胚(胚状体群)一般不能分化出根，因而能够再生出完整植株的频率很低[8-9]。因此如何有效地控制组织块上分化出大量结构正常、发育同步、成熟的胚状体应是今后研究的重点。李忠森等在液体培养方面所的初步实验显示，悬浮条件下胚状体发生的数量极多，结构正常，并且能够直接萌发，有希望通过液体培养，得到大量结构正常的胚状体[10,11]。 （2）麦草畏在体细胞胚胎发生中的研究现状 麦草畏(Dicamba) [12-13]是一种除草剂，其结构和作用类似于2,4-D，其在提高愈伤组织诱导率和胚性愈伤组织诱导率方面具有一定作用[14-15]。早在上世纪八十年代末Coumans等[16]在对玉米花粉粒培养中就将其作为细胞分裂素附加到分化培养基中并获得成功。戚家华等[17]用小麦花粉外植体接种在添加1mg/L麦草畏的培养基上，发现诱导愈伤效果优于对照，并且在诱导胚状体方面也优于对照，还发现麦草畏在进入细胞后能持续保持其诱导作用。