基因工程的工具——酶与载体.pptxVIP

原理： 基因工程：又称为DNA重组技术、转基因技术。简单 地说，就是按照人们的意愿，把一种生物 的某种基因提取出来，加以修饰改造，然 后转入到另一种生物的细胞中，定向地改 造生物的遗传性状。操作水平 ： 操作对象： 基因工程DNA分子水平 基因 目的：改造生物的遗传性状 定向基因重组 专题1 基因工程抗虫棉培育 抗虫基因来自苏云金芽孢杆菌。苏云金芽孢杆菌形成的伴胞晶体是一种毒性很强的蛋白，能使棉铃虫等害虫瘫痪致死。科学家将编码这个蛋白质的基因（即抗虫基因）导入棉细胞，培育出抗虫棉。抗虫基因棉细胞苏云金芽孢杆菌（目的基因）（受体细胞）1.1 DNA重组技术的基本工具1.1 DNA重组技术的基本工具一、“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶）1、来源：原核生物 许多细菌用切割外来DNA的方法进行自我保护，如切割某些噬菌体的DNA。这些细菌产生一种能切割DNA的核酸内切酶，一旦发现外来DNA便将其切割，因此它们有效地限制了噬菌体对细菌的感染，故这种核酸内切酶被称为限制酶。该酶不会切割自身DNA。一、“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶）2、举例：EcoRI（黏性末端）（黏性末端）GCAATTGCTAAT一、“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶）2、举例：SmaICCCGGGCGCGCG（平末端）（平末端）一、“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶）3、限制酶的作用结果：黏性末端或平末端一、“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶）4、限制酶的作用特点：特定每种限制酶都只能识别____特定核苷酸序列，并在____切点上切割DNA分子。一、“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶）5、限制酶的识别序列：（1）回文序列练一练（多选）以下是不同限制酶切割后形成的DNA片段，哪些组合是来自同一种限制酶切割后形成的末端？（ ）AC…AC…TGGC…CG…GT…CA…（1）（2）（3）…G…CTTAA G…ACGTC……CTGCA…G（5）（6）（4）A、（1）和（3）B、（1）和（2）C、（4）和（5）D、（5）和（6）一、“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶）5、限制酶的识别序列：（1）回文序列6（2）大多数限制酶的识别序列均为____个核苷酸。一、“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶）CGPPPPPAT（磷酸二酯键）P1GC2PTAP（氢键）G A A T T CC C C G G G6、限制酶的切割部位：磷酸二酯键C T T A A GG G G C C C想一想两种不同的DNA用同一种限制酶来切割，产生的黏性末端是否相同？相同G A A T T CG A A T T CC T T A A GC T T A A G用EcoRI切割G A A T T CG A A T T CC T T A A GC T T A A GⅠⅣIIIIIDNA连接酶G A A T T CC T T A A G二、“分子缝合针”——DNA连接酶1、DNA连接酶的作用：形成磷酸二酯键2、DNA连接酶的分类：来源：大肠杆菌E·coliDNA连接酶只能连接性质：黏性末端来源：T4噬菌体又能连接既能连接 性质：T4DNA连接酶黏性末端平末端DNA连接酶G A A T T C议一议C T T A A GDNA聚合酶DNA连接酶不同点连接对象将单个___________ 连接到DNA单链上，形成______________在两个________之间形成_________ 是否需要模板相同点 均形成____________脱氧核苷酸DNA片段磷酸二酯键磷酸二酯键否是磷酸二酯键三、“分子运输车”——运载体（载体）(大肠杆菌)1、质粒拟核质粒拟核细菌的质粒：独立于细菌 之外的具有自我_____ 能力的 型 状 分子。复制小环DNA三、“分子运输车”——运载体（载体）(大肠杆菌)1、质粒拟核质粒氨苄青霉素抗性基因（标记基因）三、“分子运输车”——运载体（载体）1、质粒2、运载体必须具备的条件（1）具有 切点，以便目的基因插入。（2）具有 基因（如抗生素抗性基因）， 便于 。（3）能够在宿主细胞中 并稳定保存。（4）对受体细胞 。（5）大小 ，以便于提取和操作。 限制酶标记筛选复制无害适中三、“分子运输车”——运载体（载体）1、质粒2、运载体必须具备的条件（1）具有 切点，以便目的基因插入。（2）具有 基因（如抗生素抗性基因）， 便于 。（3）能够在宿主细胞中 并稳定保存。（4）对受体细胞 。（5）大小 ，以便于提取和操作。 限制酶标记筛选复制无害适中3、常用的运载体:____、______________、_______质粒λ噬菌体的衍生物_动植物病毒反馈提高总结