体外细胞培养基本要求.ppt

插入式培养 适用于细胞趋化、侵袭实验，跨内皮层细胞爬行实验，血管生成，神经突触生长，细胞共培养，组织块培养，以及药物运转、渗透等研究。 Millicell插入式细胞培养皿,又名细胞培养小室，Transwell小室等Millicell插入式细胞培养皿有直径12mm和30mm两种规格，适合大多数标准的24孔和6孔板使用。方便用于SEM和TEM技术，与细胞和荧光染色相容。与塑料培养板上的细胞相比较，生长在Millicell插入式细胞培养皿上的细胞更能代表其体内状态；使用微孔膜可以使培养基到达细胞的两侧。Millicell插入式细胞培养皿可改善细胞分化，扩展其在分析细胞生物学上的应用；Millicell-CM包含有透明的Biopore膜，可直接透过膜观察细胞；经过组织培养基处理的插入式Millicell-PCF细胞培养皿有助于细胞的贴壁。 细胞培养板 Chamber slide 细胞冻存管 移液管 离心管 细胞计数板 * * 平谷子 电热干燥箱 台式低温离心机 低温离心机 台式离心机 高压灭菌器 恒温水浴锅 恒温水浴锅 ● 过滤除菌装置 ◆ 正压抽滤装置 ◆ 负压抽滤装置 ◆ 一次性微孔滤膜滤器 滤膜的孔径0.8μm、0.45μm、0.22μm和0.1μm等几种，除菌需要采用0.22μm滤膜。 正压滤器 负压过滤装置 负压过滤装置 一次性针式滤器 ● 其他常用仪器设备 ◆ 电子天平 一般组织培养用0.1～1mg感量的天平 ◆ 移液器 用来转移液体，包括：微量移液器、电动移液器 及多通道可调式微量移液器等。 电动移液器 微量移液器 多通道移液器 微量移液器 三、一般器械 ●主要用于解剖动物、取组织和原代培养中切割组织，如解剖刀、解剖剪、镊子和止血钳等，眼科剪、眼科镊。 ●细胞筛网：主要用于过滤经消化处理的细胞悬液。 ●细胞刮刀(Cell Scraper)：用于刮除贴壁的培养细胞。 ●插入式培养皿(culture plate insert) 细胞刮刀 细胞筛网 四. 培养器皿 ● 溶液瓶 多为玻璃瓶，用于贮存各种培养用液，以塑料螺旋盖的溶液瓶更为方便，符合无菌操作的要求。 ● 培养瓶皿 主要用于培养细胞，由于观察的需要，瓶壁透明度要高，厚薄要均匀一致。一般塑料培养器皿的细胞生长面带负电荷，有利于大多数表面带正电荷的细胞贴壁生长。 ◆细胞培养瓶 培养瓶的规格一般指培养瓶壁生长面的面积或培养瓶的容积，包括15cm2, 25cm2, 75cm2, 100cm2, 200cm2,275cm2, 500cm2, 1000cm2。 ◆ 细胞培养皿 用于分离、培养组织细胞，也可用于测定集落形成的软琼脂培养，常用规格直径为60mm ◆ 细胞培养板 96孔、24孔、6孔、4孔 ◆ 细胞记数板 ● 其他用品：移液管和吸管、离心管(离心、漂洗和分离细胞) 溶液瓶 细胞培养瓶 细胞培养皿 细胞培养板 插入式细胞培养 (五)谷氨酰胺溶液 溶液中不稳定，4℃下放置7d即可分解约50%，若培养液在4℃放置2周以上时，要重新加入原来量的谷氨酰胺溶液，使用浓度1～4mm/L。 第三节 体外培养细胞的附着底物和 抑制因素 一、附着底物 细胞贴附在底物上生长的性质呈锚着依赖性。 凡对细胞无毒性的物质都可用作底物，但不同细胞对底物要求各异。 (一) 玻璃 在较长一段时期最为常用。 优点：透明、便于观察、易洗涤、能反复使用，适于各种细胞附着生长。 缺点：易碎，一些细胞不易贴附。  (二)一次性塑料 聚苯乙烯:有疏水性，光洁平坦，适用于多种细胞的培养。使用方便，一次使用。  聚四氟乙烯:透气性好，可制成薄膜，剪成小块后置于各种瓶皿中，细胞贴附生长后，可取出染色或做成电镜切片。 (1)充电荷，具有亲水性， 适用于单层细胞培养。 (2)非充电荷，