次课单克隆抗体从诊疗到治疗.pptVIP

HGPRT酶与TK酶： 次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶 胸腺嘧啶核苷激酶 （四）杂交瘤细胞的选择性培养 应用液： 8-氮鸟嘌呤 HAT培养基： H（Hypoxanthine）:次黄嘌呤 A（Aminopterin）：氨基喋呤；叶酸拮抗物，阻断DNA合成主要途径（D途径） T（Thymidine）：胸腺嘧啶核苷酸；“核苷酸前体”，供细胞通过替代途径合成DNA。H和T联合阻断DNA合成的替代途径。 HAT选择作用： 淋巴细胞：不能生长，5~7天死亡。DNA合成的主要途径被A阻断 骨髓瘤细胞：不能生长，5~7天死亡。HGPRT缺乏，DNA合成的替代途径被阻断 SP2/O: HGPRT- ，TK-;　长命 脾细胞: HGPRT+ ，TK+ ;短命(7天) 杂交瘤细胞:HGPRT+ ，TK+; 长命 骨髓瘤细胞、脾细胞与杂交瘤细胞 杂交瘤细胞特点： 长期生长繁殖 利用淋巴细胞的HGPRT，将H合成为嘌呤碱并最终与T一起合成DNA 从淋巴细胞获得产生某种抗体的遗传信息 从骨髓瘤细胞获得不断繁殖的能力 有限稀释法(limiting dilution) FACS法（fluorescence activated cell sorter） 软琼脂平板法(soft agar method) 二、阳性杂交瘤细胞的克隆化培养与冻存 特点： 不需任何特殊设备 克隆出现效率高 实验室常用方法 方法： 细胞