动物疫病监测诊疗基础理论知识和方法基本原理.pptVIP

三、PCR检测操作程序 病料采集（采样标准、试剂盒说明书） 2.病原核酸提取（RNA、DNA） 3.RT-PCR 反转录（RNA cDNA) 4.PCR扩增 5.电泳 6.结果判定 * * Heterogenous 重读在第三音节 * 若抗原或抗体过多，比例不合适，不呈现可见反应，谓带现象。 血清学反应的特点 1. 特异性与交叉反应性 2. 可逆性：表面的结合，有可逆性 3. 适比性：比例合适，反应才可见 4. 阶段性：不可见 可见反应 5. 条件依赖性：pH，温度，电解质 抗原抗体结合除了空间结构互补外，主要以氢键、静电引力、范德华力和疏水键等非共价结合。 Ag+血清(Ab) Ag-Ab复合物 pH 7.0 T 37℃ pH＜3 T＞60℃ 表面性与可逆性 Ag和Ab结合需要适当的比例，Ag或Ab过多过少，都不能形成大的Ag-Ab复合物。 Ab 过剩 Ag 过剩 比例适当，交联成网络 网格学说 适合比例性 电解质：稀释抗原、血清常用生理盐水，但稀释禽类血清时常用8～10%高渗盐水。 酸碱度：稀释抗原、血清的溶液pH6.0～8.0均可以，为了稳定pH，在抗原抗体反应中最好用pH7.0～7.2的磷酸缓冲液作抗原抗体稀释液。 温度：通常为37℃，适当提高反应温度可增加Ag与Ab分子的碰撞机会，加速反应的出现 影响抗原抗